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madengyu

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1楼 2011-08-29 19:20:04

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xbl3688

银虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 12 (小学生)
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虫号: 1348397
注册: 2011-07-17
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
dhd997(金币+2): 楼主奖励 2011-08-30 07:58:50
dhd997(金币+2): good 2011-08-30 07:58:58

1、你都没有设置阳性对照吗？菌液PCR的时候这个很重要，如果阳性正常可以排除PCR体系和程序的问题。
2、你的问题的话，模板量是不是有点少，我是用200ul菌液离心，煮沸10分钟，加25ul灭菌水作为模板，25ul的体系加20ul。
3、另外一个这个退火温度是不是高了，一般是引物Tm值减去5左右。之前这个温度做出来过吗？不确定退火温度的话，不妨做个60-50℃的降落PCR。

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生活的乐趣在于善于发现美，学会欣赏美

5楼2011-08-29 21:45:04

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