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vickie20

铜虫 (小有名气)

[求助] 提不出质粒,不知道出了什么问题,求助……

我用的大肠杆菌BM25.8提质粒,菌已经保存一年多了,我用保存的菌液划板,然后挑取单菌落接种到液体LB里摇过夜,再用这些长好的菌液提,用的是biomiga的试剂盒,按照说明书的步骤来的,操作是没什么问题,这些质粒空载体大小有3589bp,目的基因已经测序,800-1000bp,提好后跑胶,用的5000bp的Marker,提出来的东西都比5000大,这些都不是质粒吧?做了十来天了都一直都没提好,不知道出了什么问题,原来看了好多帖子,变性时间啊,温和混匀啊,这些我都小心操作了,但是都提不出来,不知道哪里出问题了,求各位帮我分析下,哪里出差错了。附上其中一张电泳图。
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

有两个泳道里能看到条带,把这两个质粒酶切验证一下
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7楼2011-08-04 18:47:35
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

还有你竟然拿mark来标定质粒的大小,这是完全错误的。mark只能标定线性DNA的大小!
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9楼2011-08-04 19:03:39
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by vickie20 at 2011-08-04 19:34:45:
但是超螺旋啊开环啊的位置都应该在线性的下面吧?也就是说应该是在目的位置的下面吧?

质粒理论上是可以三种形式存在着,但实际跑胶时能看到一到三条带都是正常的,并且如果质粒提的质量很好,基本上都是超螺旋的,所以要确定质粒的大小,只有酶切后才能知道
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
11楼2011-08-04 23:07:13
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