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bear0329

金虫 (正式写手)

[求助] 16srDNA扩增问题,急

PCR体系
     总体积                 30 μl
10×Buffer              3 μl
dNTP(0.25 mM)          0.5 μl
Taq DNA polymerase      0.3 μl
27F(25μM)              1 μl
907R(25μM)             1 μl
BSA                    0.2 μl
模板DNA               1 μl
ddH2O                  13 μl
PCR程序
94℃预变性3min,94℃变性1min,54℃退火45s,72℃延伸90s,32个循环,72℃延伸10min。
PCR结果:

怎么有的扩增了有的没有扩增到啊,提取的时候都是有的。PCR体系和程序有什么问题吗?还有就是,PCR产物ED染色后跑胶检测,开始就拍到上图,过了一会连MARKER都很淡了,这又是为什么啊?谢谢了

[ Last edited by bear0329 on 2011-6-13 at 21:16 ]
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以马内利!
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JessieDai

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 同意。 2011-06-14 22:37:39
增高退火温度,特异性增加,但是量会减少,降低温度,量增加,特异性降低
10楼2011-06-14 16:46:58
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