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tinalovebio

银虫 (初入文坛)

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[求助] PCR产物电泳时，为什么有的条带不亮，有的特别亮呀？

三个样，同样的PCR条件，30多个循环，一块电泳。两个有条带，一个不亮，一个特别亮，一个没有条带，这是怎么回事呢

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1楼 2011-05-31 23:33:38

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cellline

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
jhu132llh(金币+2): 恩，有道理 2011-06-01 12:23:02

剔除加样量的影响，首先想到的是模板的丰度，如果模板量很少，可能会影响PCR产量。模板的丰度很可能是在提取过程中样品的某些物质，如蛋白含量，影响了

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2楼2011-06-01 08:13:05

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adslye

银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): 说的对，首先是应该排除个人因素 2011-06-01 12:23:36
tinalovebio(金币+5): 谢谢 2011-06-10 10:33:29

重复一遍再来发帖。自己先尽量剔除操作失误别人才能更好的帮你。

1.PCR一个亮一个不亮，如果每次都这样，那说明模板量少，或是目标条带短（条带短自然结合EB少）。其他像扩增效率，试剂污染等因素概率比较少。
2，没产物：一来引物有没有问题，二，模板有没有问题，三，你的PCR条件是否合适你的引物。

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3楼2011-06-01 08:42:30

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gywuq

银虫 (小有名气)

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把没有条带的样品稀释后，作为模板扩增一次，看是否有结果。

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努力找到属于自己的平台

4楼2011-07-08 19:20:45

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爱琪琪吉子77

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没有条带的是没有此段基因片段，不亮的是不是量不够

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5楼2015-05-29 22:44:51

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