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tinalovebio

银虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物电泳时,为什么有的条带不亮,有的特别亮呀?

三个样,同样的PCR条件,30多个循环,一块电泳。两个有条带,一个不亮,一个特别亮,一个没有条带,这是怎么回事呢
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cellline

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
jhu132llh(金币+2): 恩,有道理 2011-06-01 12:23:02
剔除加样量的影响,首先想到的是模板的丰度,如果模板量很少,可能会影响PCR产量。模板的丰度很可能是在提取过程中样品的某些物质,如蛋白含量,影响了
2楼2011-06-01 08:13:05
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jhu132llh(金币+3): 说的对,首先是应该排除个人因素 2011-06-01 12:23:36
tinalovebio(金币+5): 谢谢 2011-06-10 10:33:29
重复一遍再来发帖。自己先尽量剔除操作失误别人才能更好的帮你。

1.PCR一个亮一个不亮,如果每次都这样,那说明模板量少,或是目标条带短(条带短自然结合EB少)。其他像扩增效率,试剂污染等因素概率比较少。
2,没产物:一来引物有没有问题,二,模板有没有问题,三,你的PCR条件是否合适你的引物。
3楼2011-06-01 08:42:30
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gywuq

银虫 (小有名气)

把没有条带的样品稀释后,作为模板扩增一次,看是否有结果。
努力找到属于自己的平台
4楼2011-07-08 19:20:45
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爱琪琪吉子77

铜虫 (初入文坛)

没有条带的是没有此段基因片段,不亮的是不是量不够
5楼2015-05-29 22:44:51
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