应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白纯化一个很挠头的问题，请高手指教！
51/1返回列表
查看: 1913  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jia1012428

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化一个很挠头的问题，请高手指教！

1.用离子交换柱做纯化，上样后洗脱未被柱子结合的蛋白，总能洗下来一个尖峰，而在拉Nacl溶液梯度的时候，也能洗脱下的几个峰，但这些峰都没有酶活。
2.后来增大了上样量，还是这种情况，只不过每个峰都高和宽一些，更重要的是，在洗脱未被结合的蛋白的峰那里测到了酶活。
请问我的这种情况是不是书上说的柱子只结合杂蛋白，而不结合目的蛋白？
另外，1中测不到目的峰的酶活是不是因为蛋白太稀了，酶活检测不到；2中洗脱未结合的目的峰有发酵液色素的颜色，是不是上样量太大了，都没吸附到柱子上啊，所以才有酶活？
请高手指点！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-14 18:30:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
是的，目标蛋白质流穿也是有好处的，去试试吧。不过如果还是不纯的话，就推荐除盐干净一些，我是不喜欢色素的，为了除色素我也曾经死过不少脑细胞了。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2011-05-16 16:27:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

。。。。。。。。。。。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-05-15 00:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

jia1012428(金币+2): 专业，不用再说明！ 2011-05-15 23:11:13
silicare(EPI+1): 2011-05-16 08:40:04
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-15 00:09:51:
。。。。。。。。。。。

你想要的蛋白质等电点可能是多少，上样缓冲液的pH值是多少？如果是阳离子柱，那么蛋白质等电点要比上样缓冲液的pH值高；如果是阴离子柱，那么蛋白质等电点要比上样缓冲液的pH值低。而且要有一个pH值的差别才好吸附。

无论是阴还是阳，吸附的时候都要保持低盐，如果蛋白质等电点和上样缓冲液的pH值相差不大，那么一点儿盐就能解吸附，你要的蛋白质就只会在穿透液中。

下面传一张图片，AKTA的，你可以看A280曲线，穿透液里有很多蛋白质。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-05-15 00:11:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jia1012428

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-15 00:11:18:
你想要的蛋白质等电点可能是多少，上样缓冲液的pH值是多少？如果是阳离子柱，那么蛋白质等电点要比上样缓冲液的pH值高；如果是阴离子柱，那么蛋白质等电点要比上样缓冲液的pH值低。而且要有一个pH值的差别才好 ...

哥们，咱俩的图差不多啊，我用的阴离子交换柱。这也算纯化蛋白了把，但是我感觉第二次上样量太大了，洗脱未结合的蛋白时下来的液体有色素的颜色，是不是需要减少上样量啊。
赞一下 回复此楼
4楼2011-05-15 22:52:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 13:23 by xiangy672
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +3 雨打竹帘 2026-08-30 4/200 2026-08-30 12:35 by 白大多亮
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 12:13 by l0VvVHGBGRLv
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 11:51 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 17/850 2026-08-30 10:28 by 孤独的英雄6
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 06:22 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭