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jia1012428铜虫 (小有名气)
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蛋白纯化一个很挠头的问题，请高手指教！
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1.用离子交换柱做纯化，上样后洗脱未被柱子结合的蛋白，总能洗下来一个尖峰，而在拉Nacl溶液梯度的时候，也能洗脱下的几个峰，但这些峰都没有酶活。 2.后来增大了上样量，还是这种情况，只不过每个峰都高和宽一些，更重要的是，在洗脱未被结合的蛋白的峰那里测到了酶活。 请问我的这种情况是不是书上说的柱子只结合杂蛋白，而不结合目的蛋白？ 另外，1中测不到目的峰的酶活是不是因为蛋白太稀了，酶活检测不到；2中洗脱未结合的目的峰有发酵液色素的颜色，是不是上样量太大了，都没吸附到柱子上啊，所以才有酶活？ 请高手指点！ |
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【答案】应助回帖
jia1012428(金币+2): 专业，不用再说明！ 2011-05-15 23:11:13
silicare(EPI+1): 2011-05-16 08:40:04
silicare(EPI+1): 2011-05-16 08:40:04
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你想要的蛋白质等电点可能是多少，上样缓冲液的pH值是多少？如果是阳离子柱，那么蛋白质等电点要比上样缓冲液的pH值高；如果是阴离子柱，那么蛋白质等电点要比上样缓冲液的pH值低。而且要有一个pH值的差别才好吸附。 无论是阴还是阳，吸附的时候都要保持低盐，如果蛋白质等电点和上样缓冲液的pH值相差不大，那么一点儿盐就能解吸附，你要的蛋白质就只会在穿透液中。 下面传一张图片，AKTA的，你可以看A280曲线，穿透液里有很多蛋白质。  |
3楼2011-05-15 00:11:18
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