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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 紫外分光光度法测蛋白酶活
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Dancing325

金虫 (正式写手)

[求助] 紫外分光光度法测蛋白酶活 已有2人参与

紫外分光光度法测蛋白酶活：
按下列程序操作：
试管A（空白）                              试管B（酶试样，三个平行试样）
加酶液2.00 mL                                加酶液2.00 mL
40±0.2℃，2min                              40±0.2℃，2min
加三氯乙酸4.00 mL（摇匀）           加酪素2.00mL(已预热)（摇匀）
40±0.2℃，10min（精确计时）      40±0.2℃，10min（精确计时）
加酪素2.00mL(已预热)（摇匀）      加三氯乙酸4.00mL（摇匀）
继续加热10min，过滤或离心           继续加热10min，过滤或离心
于275nm波长，测上清液吸光值       于275nm波长，测上清液吸光值

按以上步骤，紫外测定时，以试管A液作为空白，试管B液吸光度却为负值，请问这是为什么，哪里出现问题了？谢谢！
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1楼 2011-05-05 23:51:37
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaojiewhk

新虫 (小有名气)
我的测得也是这样，要不就是值很低，不知道哪里出问题了，都怀疑这方法了。
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8楼2011-05-24 15:52:04
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普通回帖

烟花诺言

铁杆木虫 (职业作家)

木虫诸葛

【答案】应助回帖

空白的与所测样品的比色皿位置放反了
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有些事如果不能改变，那么就试着去适应它
2楼2011-05-06 08:27:29
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Dancing325

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 烟花诺言 at 2011-05-06 08:27:29:
空白的与所测样品的比色皿位置放反了

试管B（酶试样，三个平行试样）,三个样都为负值，应该不是你说的这个问题。测了两遍还是一样。
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3楼2011-05-06 08:42:52
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

silicare:编辑内容 2011-05-25 09:00
***********

[ Last edited by silicare on 2011-5-25 at 09:00 ]
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4楼2011-05-06 23:07:03
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶液是什么酶啊，酶的底物又是什么啊，两个毫不相干的物质怎么反应啊，怎么测酶活？
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5楼2011-05-18 12:16:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

Dancing325(金币+1): 你说的我之前也怀疑过 2011-05-29 15:38:54
活力太低所以测定不出来，测定的系统误差倒是出来了。误差有正有负，你的是负的，说不定什么时候就又是正的了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-05-19 02:08:13
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可能对照液的透光度不够  调100时有问题
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快乐奋斗，创造所有。
7楼2011-05-19 10:19:22
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Dancing325

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5): 鼓励反馈！！！ 2011-05-30 12:05:34
谢谢大家的建议，我的问题找到了，居然是有个相像的玻璃比色皿冒充石英，悲愤啊！
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9楼2011-05-29 15:23:54
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Dancing325

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaojiewhk at 2011-05-24 15:52:04:
我的测得也是这样，要不就是值很低，不知道哪里出问题了，都怀疑这方法了。

可能你的酶酶活太低了，或者pH值没调好吧。
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10楼2011-05-29 15:33:16
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