应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 紫外吸收 测蛋白含量的 标准曲线制作问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 2606  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小子木雨

铜虫 (小有名气)

[求助] 紫外吸收 测蛋白含量的 标准曲线制作问题

我用牛血清蛋白用0.9%的氯化钠配成到1mg/ml浓度，然后按下表
牛血清蛋白溶液（ml)        蒸馏水（ml)
0                                      4
0.5                                      3.5
1                                      3
1.5                                      2.5
2                                      2
2.5                                      1.5
3                                      1
3.5                                      0.5
4                                      0
加入试管中，以第一个管为参比，测定280nm下的吸光值，为什么出现的值都是0.2% ，Abs是2.776、2.755、2.785呢?希望尽快得到您的解答，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-04 16:54:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tpFlexin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-01-05 18:57:39
方法看上去没错啊，是不是你错用了玻璃比色皿？
我能想到的只有这个了，玻璃比色皿在紫外区有吸收
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-05 16:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-01-05 20:10:51
小子木雨: 金币+3, ★★★很有帮助, 我用的不是考马斯法 我用的是紫外吸收法，而且今天我又稀释了一下，测出的结果还是在2.几，很是郁闷呢 2013-01-08 20:33:49
估计不错的话，你应该是用的brandford法测定蛋白（也就是场所的考马斯亮蓝G250法）。我感觉你的初始牛血清蛋白浓度偏高，我们一般配0.1mg/ml,然后稀释不同倍数（类似你的操作，溶液体系一样大）。我们的经验是10-90ug/ml线性比较好，你的浓度太高了，超出了量程，自然就不是线性了。还有就是brandford法要求玻璃比色皿，浓度从低往高测定，测完后要清洗干净（乙醇浸泡，蒸馏水冲洗，测定液润洗0），再测下一个。一般相关系数都能到0.985左右。
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-05 19:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hqsinberg at 2013-01-05 19:04:15
估计不错的话，你应该是用的brandford法测定蛋白（也就是场所的考马斯亮蓝G250法）。我感觉你的初始牛血清蛋白浓度偏高，我们一般配0.1mg/ml,然后稀释不同倍数（类似你的操作，溶液体系一样大）。我们的经验是10-90 ...

再就是考马斯亮蓝法不能用石英比色皿，玻璃的即可。具体事宜可以参见http://www.doc88.com/p-78740359566.html，里面的做法比较准确
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-05 19:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherry0012

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
所以如果是这种方法，测定波长应该是595nm
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-01-07 09:24:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小子木雨

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sherry0012 at 2013-01-07 09:24:21
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染 ...

谢谢啊 不过我用的是紫外吸收法测的蛋白含量 标准曲线是1mg/ml的牛血清蛋白，今天稀释了5倍还是2.7几的数值， 很郁闷，不知道问题出在了哪里
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-08 20:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小子木雨

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tpFlexin at 2013-01-05 16:58:46
方法看上去没错啊，是不是你错用了玻璃比色皿？
我能想到的只有这个了，玻璃比色皿在紫外区有吸收

谢谢  我在280纳米处测的吸光值 应该没什么影响吧 就是不知道问题出在哪里
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-01-08 20:39:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫
引用回帖:
3楼: Originally posted by hqsinberg at 2013-01-05 19:04:15
估计不错的话，你应该是用的brandford法测定蛋白（也就是场所的考马斯亮蓝G250法）。我感觉你的初始牛血清蛋白浓度偏高，我们一般配0.1mg/ml,然后稀释不同倍数（类似你的操作，溶液体系一样大）。我们的经验是10-90 ...

如果拟采用260nm紫外吸收测定，必须采用石英比色皿
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-11-18 20:53:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小子木雨 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 277求调剂 +5 瓶子PZ 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:00 by yulian1987
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +5 常雨阳上岸 2026-04-05 6/300 2026-04-05 13:42 by imissbao
[考研] 085600，专业课化工原理，320分求调剂 +10 大馋小子 2026-03-29 10/500 2026-04-05 12:49 by Hdyxbekcb
[考研] 085410人工智能 初试316分 求调剂 +6 残星拂曙 2026-03-31 6/300 2026-04-05 12:15 by rainbow11
[考研] 一志愿北京化工大学，初试成绩350求调剂 +9 沿岸?贝壳 2026-04-04 14/700 2026-04-05 01:09 by 沿岸?贝壳
[考研] 材料334求调剂 +15 Eecho# 2026-04-03 15/750 2026-04-04 23:05 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +4 晟功? 2026-04-03 4/200 2026-04-04 21:58 by hemengdong
[考研] 0703求调剂 +6 zizimo 2026-03-31 6/300 2026-04-04 14:16 by 无际的草原
[考研] 一志愿085404，总分291，四级已过，求调剂 +5 阿俊阿俊阿俊 2026-04-04 7/350 2026-04-04 13:23 by 莲菜就是藕吧
[考研] 295求调剂 +3 尚偌呀 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:23 by zhq0425
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 085600 295分求调剂 +19 W55j 2026-03-30 23/1150 2026-04-03 09:53 by 千千运气
[考研] 材料考研调剂 +10 Gs大王 2026-04-02 10/500 2026-04-03 09:47 by 遗忘消失的灆
[考研] 一志愿a区211，085601-307分求调剂 +13 党嘉豪 2026-03-31 26/1300 2026-04-03 08:33 by 495374996
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-31 7/350 2026-04-01 22:04 by 客尔美德
[考研] 086000生物与医药 初试274求调剂 +5 小叮当来了 2026-03-30 6/300 2026-04-01 14:25 by mxj1203
[考研] 求调剂：一志愿：南京大学 专业：0705 总分320 ，本科985，四六级已过 +3 lfy760306 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:57 by Creta
[考研] 合肥区域性重点一本招收调剂 +4 6266jl 2026-03-30 8/400 2026-03-31 18:43 by 6266jl
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭