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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 小分子蛋白测紫外吸光值
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鲜鲜橙多

木虫 (小有名气)

[交流] 小分子蛋白测紫外吸光值

硫酸铵沉淀蛋白后，上清液直接走柱子，然后用紫外吸收测OD值，按理说这算小分子蛋白，那应该用OD值多少的测比较合适？老师让我用OD210，那OD200，OD220之类的可以么？
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1楼 2011-10-14 09:35:43
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-10-14 19:32:27
鲜鲜橙多(金币+2): 2011-10-15 17:45:44
蛋白是280，核酸用254. DNA用215，仅供参考
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2楼2011-10-14 09:40:18
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暖木warm

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
过的是什么柱子？
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3楼2011-10-14 18:57:45
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doublehelix

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看天(金币+2): 鼓励交流 2011-10-14 22:02:42
鲜鲜橙多(金币+3): 2011-10-15 21:01:54
无论大小，蛋白是280，除非小到只是几个或几十个的多肽，可根据氨基酸的性质设相应吸光值。
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4楼2011-10-14 22:00:45
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
如果你要准确判定，应该用你打算检测的目标蛋白做一个WLS，然后再选择检测波长；其次，虽然我没有做过类似的试验，但是一个分子的特征吸收波长是不能随意取的！否则你的数据就很难让人信服！
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鲜鲜橙多
5楼2011-10-14 23:52:15
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鲜鲜橙多

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暖木warm at 2011-10-14 18:57:45:
过的是什么柱子？

LH-20
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6楼2011-10-15 17:29:03
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鲜鲜橙多

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by doublehelix at 2011-10-14 22:00:45:
无论大小，蛋白是280，除非小到只是几个或几十个的多肽，可根据氨基酸的性质设相应吸光值。

从硫酸铵沉淀的上清液中分析，属于未知分子，怀疑是蛋白小分子或者多肽之类的，但是也可能是其他。所以无法根据氨基酸的性质决定。
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7楼2011-10-15 17:40:09
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鲜鲜橙多

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-10-14 23:52:15:
如果你要准确判定，应该用你打算检测的目标蛋白做一个WLS，然后再选择检测波长；其次，虽然我没有做过类似的试验，但是一个分子的特征吸收波长是不能随意取的！否则你的数据就很难让人信服！

很惭愧的说，我不知道WLS是啥，羞涩捂脸。目前是摸索阶段，好多我都不清楚，都要学习，谢谢提示
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8楼2011-10-15 17:49:49
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quiller2000

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
鲜鲜橙多(金币+6): 2011-10-15 21:02:01
呵呵,大家都是在学习的！只是刚刚接触过这些而已，而大家知道的，我也一点儿都不清楚！

就是说，如果你需要用小肽的紫外吸收来确定其含量，最好先做一个全波长扫描（WaveLength Scan）,确定其合适的吸收波长，然后再建立浓度-吸收值之间的关系！
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9楼2011-10-15 19:00:15
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