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小分子蛋白测紫外吸光值
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鲜鲜橙多
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[交流]
小分子蛋白测紫外吸光值
硫酸铵沉淀蛋白后,上清液直接走柱子,然后用紫外吸收测OD值,按理说这算小分子蛋白,那应该用OD值多少的测比较合适?老师让我用OD210,那OD200,OD220之类的可以么?
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adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-10-14 19:32:27
鲜鲜橙多(金币+2): 2011-10-15 17:45:44
蛋白是280,核酸用254. DNA用215,仅供参考
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2011-10-14 09:40:18
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过的是什么柱子?
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2011-10-14 18:57:45
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看天(金币+2): 鼓励交流 2011-10-14 22:02:42
鲜鲜橙多(金币+3): 2011-10-15 21:01:54
无论大小,蛋白是280,除非小到只是几个或几十个的多肽,可根据氨基酸的性质设相应吸光值。
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2011-10-14 22:00:45
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如果你要准确判定,应该用你打算检测的目标蛋白做一个WLS,然后再选择检测波长;其次,虽然我没有做过类似的试验,但是一个分子的特征吸收波长是不能随意取的!否则你的数据就很难让人信服!
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2011-10-14 23:52:15
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at 2011-10-14 22:00:45:
无论大小,蛋白是280,除非小到只是几个或几十个的多肽,可根据氨基酸的性质设相应吸光值。
从硫酸铵沉淀的上清液中分析,属于未知分子,怀疑是蛋白小分子或者多肽之类的,但是也可能是其他。所以无法根据氨基酸的性质决定。
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7楼
2011-10-15 17:40:09
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quiller2000
at 2011-10-14 23:52:15:
如果你要准确判定,应该用你打算检测的目标蛋白做一个WLS,然后再选择检测波长;其次,虽然我没有做过类似的试验,但是一个分子的特征吸收波长是不能随意取的!否则你的数据就很难让人信服!
很惭愧的说,我不知道WLS是啥,羞涩捂脸。目前是摸索阶段,好多我都不清楚,都要学习,谢谢提示
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8楼
2011-10-15 17:49:49
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quiller2000
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鲜鲜橙多(金币+6): 2011-10-15 21:02:01
呵呵,大家都是在学习的!只是刚刚接触过这些而已,而大家知道的,我也一点儿都不清楚!
就是说,如果你需要用小肽的紫外吸收来确定其含量,最好先做一个全波长扫描(WaveLength Scan),确定其合适的吸收波长,然后再建立浓度-吸收值之间的关系!
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9楼
2011-10-15 19:00:15
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