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小子木雨

铜虫 (小有名气)

[求助] 紫外吸收 测蛋白含量的 标准曲线制作问题

我用牛血清蛋白用0.9%的氯化钠配成到1mg/ml浓度,然后按下表
牛血清蛋白溶液(ml)        蒸馏水(ml)
0                                      4
0.5                                      3.5
1                                      3
1.5                                      2.5
2                                      2
2.5                                      1.5
3                                      1
3.5                                      0.5
4                                      0
加入试管中,以第一个管为参比,测定280nm下的吸光值,为什么出现的值都是0.2% ,Abs是2.776、2.755、2.785呢?希望尽快得到您的解答,谢谢
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sherry0012

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式,红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色,最大光吸收在465nm,当它与蛋白质结合后变为蓝色,最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白质浓度范围内,蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比,通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
所以如果是这种方法,测定波长应该是595nm
5楼2013-01-07 09:24:21
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