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小子木雨铜虫 (小有名气)
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[求助]
紫外吸收 测蛋白含量的 标准曲线制作问题
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我用牛血清蛋白用0.9%的氯化钠配成到1mg/ml浓度，然后按下表 牛血清蛋白溶液（ml) 蒸馏水（ml) 0 4 0.5 3.5 1 3 1.5 2.5 2 2 2.5 1.5 3 1 3.5 0.5 4 0 加入试管中，以第一个管为参比，测定280nm下的吸光值，为什么出现的值都是0.2% ，Abs是2.776、2.755、2.785呢?希望尽快得到您的解答，谢谢 |
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小子木雨
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hqsinberg
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laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-01-05 20:10:51
小子木雨: 金币+3, ★★★很有帮助, 我用的不是考马斯法 我用的是紫外吸收法，而且今天我又稀释了一下，测出的结果还是在2.几，很是郁闷呢 2013-01-08 20:33:49
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| 估计不错的话，你应该是用的brandford法测定蛋白（也就是场所的考马斯亮蓝G250法）。我感觉你的初始牛血清蛋白浓度偏高，我们一般配0.1mg/ml,然后稀释不同倍数（类似你的操作，溶液体系一样大）。我们的经验是10-90ug/ml线性比较好，你的浓度太高了，超出了量程，自然就不是线性了。还有就是brandford法要求玻璃比色皿，浓度从低往高测定，测完后要清洗干净（乙醇浸泡，蒸馏水冲洗，测定液润洗0），再测下一个。一般相关系数都能到0.985左右。 |
3楼2013-01-05 19:04:15
hqsinberg
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