应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 紫外吸收 测蛋白含量的 标准曲线制作问题
51/1返回列表
查看: 2584  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

小子木雨

铜虫 (小有名气)

[求助] 紫外吸收 测蛋白含量的 标准曲线制作问题

我用牛血清蛋白用0.9%的氯化钠配成到1mg/ml浓度，然后按下表
牛血清蛋白溶液（ml)        蒸馏水（ml)
0                                      4
0.5                                      3.5
1                                      3
1.5                                      2.5
2                                      2
2.5                                      1.5
3                                      1
3.5                                      0.5
4                                      0
加入试管中，以第一个管为参比，测定280nm下的吸光值，为什么出现的值都是0.2% ，Abs是2.776、2.755、2.785呢?希望尽快得到您的解答，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-04 16:54:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by hqsinberg at 2013-01-05 19:04:15
估计不错的话，你应该是用的brandford法测定蛋白（也就是场所的考马斯亮蓝G250法）。我感觉你的初始牛血清蛋白浓度偏高，我们一般配0.1mg/ml,然后稀释不同倍数（类似你的操作，溶液体系一样大）。我们的经验是10-90 ...

再就是考马斯亮蓝法不能用石英比色皿，玻璃的即可。具体事宜可以参见http://www.doc88.com/p-78740359566.html，里面的做法比较准确
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-05 19:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

tpFlexin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-01-05 18:57:39
方法看上去没错啊，是不是你错用了玻璃比色皿？
我能想到的只有这个了，玻璃比色皿在紫外区有吸收
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-05 16:58:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqsinberg

木虫 (著名写手)

清风小木虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-01-05 20:10:51
小子木雨: 金币+3, ★★★很有帮助, 我用的不是考马斯法 我用的是紫外吸收法，而且今天我又稀释了一下，测出的结果还是在2.几，很是郁闷呢 2013-01-08 20:33:49
估计不错的话，你应该是用的brandford法测定蛋白（也就是场所的考马斯亮蓝G250法）。我感觉你的初始牛血清蛋白浓度偏高，我们一般配0.1mg/ml,然后稀释不同倍数（类似你的操作，溶液体系一样大）。我们的经验是10-90ug/ml线性比较好，你的浓度太高了，超出了量程，自然就不是线性了。还有就是brandford法要求玻璃比色皿，浓度从低往高测定，测完后要清洗干净（乙醇浸泡，蒸馏水冲洗，测定液润洗0），再测下一个。一般相关系数都能到0.985左右。
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-05 19:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherry0012

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
所以如果是这种方法，测定波长应该是595nm
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-01-07 09:24:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +3 vv迷 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:05 by f19980501
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考！ +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 350求调剂 +5 weudhdk 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:04 by luoyongfeng
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +8 niko- 2026-03-19 9/450 2026-03-20 21:57 by luoyongfeng
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿南京大学，080500材料科学与工程，调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 327求调剂 +6 拾光任染 2026-03-15 11/550 2026-03-15 22:47 by 拾光任染
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭