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Dancing325

金虫 (正式写手)

[求助] 紫外分光光度法测蛋白酶活 已有2人参与

紫外分光光度法测蛋白酶活:
按下列程序操作:
试管A(空白)                              试管B(酶试样,三个平行试样)
加酶液2.00 mL                                加酶液2.00 mL
40±0.2℃,2min                              40±0.2℃,2min
加三氯乙酸4.00 mL(摇匀)           加酪素2.00mL(已预热)(摇匀)
40±0.2℃,10min(精确计时)      40±0.2℃,10min(精确计时)
加酪素2.00mL(已预热)(摇匀)      加三氯乙酸4.00mL(摇匀)
继续加热10min,过滤或离心           继续加热10min,过滤或离心
于275nm波长,测上清液吸光值       于275nm波长,测上清液吸光值

按以上步骤,紫外测定时,以试管A液作为空白,试管B液吸光度却为负值,请问这是为什么,哪里出现问题了?谢谢!
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Dancing325

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 烟花诺言 at 2011-05-06 08:27:29:
空白的与所测样品的比色皿位置放反了

试管B(酶试样,三个平行试样),三个样都为负值,应该不是你说的这个问题。测了两遍还是一样。
3楼2011-05-06 08:42:52
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Dancing325

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5): 鼓励反馈!!! 2011-05-30 12:05:34
谢谢大家的建议,我的问题找到了,居然是有个相像的玻璃比色皿冒充石英,悲愤啊!
9楼2011-05-29 15:23:54
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Dancing325

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xiaojiewhk at 2011-05-24 15:52:04:
我的测得也是这样,要不就是值很低,不知道哪里出问题了,都怀疑这方法了。

可能你的酶酶活太低了,或者pH值没调好吧。
10楼2011-05-29 15:33:16
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Dancing325

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by smdsfy at 2011-05-18 12:16:01:
酶液是什么酶啊,酶的底物又是什么啊,两个毫不相干的物质怎么反应啊,怎么测酶活?

中性蛋白酶,底物是干酪素(一般要求酪素,纯度高)。
11楼2011-05-29 15:36:33
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Dancing325

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xiaojiewhk at 2011-05-29 20:47:07:
恩,可能是pH的事,给一个老师做的,也没多看,后来他跟我提过一点。谢谢你啊

有段时间没来了。我也只是提个建议了,相互照顾么~
14楼2011-06-30 23:28:12
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Dancing325

金虫 (正式写手)

引用回帖:
1581615楼: Originally posted by lare77 at 2012-10-15 09:29:00
我以前跟你一样 把玻璃的跟石英的搞混了,因为玻璃在275nm左右自身会有吸光值,而在680nm处时,玻璃比色皿对于结果的测量的影响就不那么大了。

嗯,好在我们都找到原因了,不然让石英和玻璃绊倒就太不值得了。
17楼2012-10-16 20:02:10
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