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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 原核表达WB 多条带
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wyhwawj_87

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助 原核表达WB 多条带 已有5人参与

我用的是PET-28，在BL21中的表达，IPTG 0.5mM 诱导4h，菌体制样SDS-PAGE和WB,page胶考染没有差异条带，WB检测时却有多条带，并且比预计大（20kd》10kd） 我换过载体和表达菌株都出现了这个问题！！请问大侠们是什么问题啊？？！！！

  自己分析：我的片段含有多对二硫键，80个aa中含有24个CYS ,是否可能是二硫键太多形成了多聚体，多聚体之间又因为二硫键的断裂而形成大小不一的单体？？？
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好想好想啊 ~~~
1楼 2011-05-03 14:36:04
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wyhwawj_87

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): 很好学！鼓励哦！ 2011-05-05 12:38:48
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-05-03 14:48:18:
加1mmol的DTT再做看看

我做蛋白制样的时候一般都是100度加热10min，然后还加了B-巯基乙醇,你觉得DTT 效果会好很多吗？？
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好想好想啊 ~~~
10楼2011-05-05 11:27:07
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xuguanghai

木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+1): 可以详细一点 2011-05-03 16:14:47
加1mmol的DTT再做看看
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-05-03 14:48:18
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+2): 很有建设性 2011-05-03 16:15:45
除了多聚体的原因，你的一抗是否特异性很强，你收否做了空菌裂解液的WB？
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-05-03 15:12:41
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+2): 有理 2011-05-03 21:06:45
要不就是实验没做好，最大是你的抗体不好用，楼主的抗体是自己做的嘛？
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-05-03 20:48:25
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