应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选出现的问题
121/2返回列表12下一页
查看: 3532  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 蓝白斑筛选出现的问题

大家好，我在做蓝白斑筛选的时候使用宝生物的PMD18-T载体，我在做阴性对照的使用灭过菌的双蒸水代替PCR产物与载体连接，可是在平板上长出来的菌都是白斑，我不能理解为什么阴性对照长出来的不是蓝斑都是白斑？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力，不抱怨
1楼 2011-04-21 18:57:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 不错 2011-04-22 09:18:17
jiajunhui(金币+1): 2011-04-22 09:36:26
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-21 22:54:24:
1：板子上长出来的全部是白斑不是蓝斑说明连接没什么问题啊，你的目的基因插入到了LacZ上面，当然了你可以进行酶切或者PCR验证滴。。。
2：至于你说你阴性对照的板子上全部是白斑，这个阴性对照的板子上面应该都 ...

楼主那种阴性对照的做法，可以检测载体自连的比例有多高，我们一般像楼主那样做呢。
个人觉得X-gal、IPTG有问题的可能性比较大，呵呵~
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-04-21 23:09:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

shandongfmmu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-21 21:16:38

你好！
蓝白筛选，是再涂有IPTG和X-GAL的筛选平板上，重组菌株为白色，未转入重组质粒的是蓝色。所以我猜想既然阴对也是白色，应该是转入质粒了，有可能是载体切割的问题~比如载体没切开，或者是单酶切了~
     祝您成功！
赞一下(1人) 回复此楼
快乐~~~~~~~
2楼2011-04-21 19:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-21 21:16:44
jiajunhui(金币+1): 2011-04-22 09:34:52
jiajunhui(金币+1): 2011-04-22 09:37:00
若是基本不长蓝斑，那请确认IPTG，和X-gal是否有效，使用方法是否正确。

排除T载体有问题，或者操作有问题，可能性不大
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-21 20:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 继续努力啊 2011-04-22 09:09:06
1：板子上长出来的全部是白斑不是蓝斑说明连接没什么问题啊，你的目的基因插入到了LacZ上面，当然了你可以进行酶切或者PCR验证滴。。。
2：至于你说你阴性对照的板子上全部是白斑，这个阴性对照的板子上面应该都是蓝斑的，不知道你这个阴性对照是怎么做的？

我认为对照应该是这样：重组载体转化进大肠，然后涂布；阴性对照是空质粒转大肠，涂布。。。。

不知道楼主是如何选对照的？还有你的X-gal是否有问题呢？
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-21 22:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-21 22:54:24:
1：板子上长出来的全部是白斑不是蓝斑说明连接没什么问题啊，你的目的基因插入到了LacZ上面，当然了你可以进行酶切或者PCR验证滴。。。
2：至于你说你阴性对照的板子上全部是白斑，这个阴性对照的板子上面应该都 ...

你好，我现在做的是PCR产物与pMD18-T载体连接，阴性对照就是用灭过菌双蒸水代替PCR产物，结果无蓝斑产生，还有我理解你做阴性对照的意思，可是我现在出现的问题和你说的不一样！
赞一下 回复此楼
努力，不抱怨
6楼2011-04-22 09:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by shandongfmmu at 2011-04-21 19:53:26:

你好！
蓝白筛选，是再涂有IPTG和X-GAL的筛选平板上，重组菌株为白色，未转入重组质粒的是蓝色。所以我猜想既然阴对也是白色，应该是转入质粒了，有可能是载体切割的问题~比如载体没切开，或者是单酶切了~ ...

你好，我使用的T载体，不是空质粒，不是用载体与目的片段连接！
赞一下 回复此楼
努力，不抱怨
7楼2011-04-22 09:40:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-04-22 16:41:37
引用回帖:
Originally posted by jiajunhui at 2011-04-22 09:34:22:
你好，我现在做的是PCR产物与pMD18-T载体连接，阴性对照就是用灭过菌双蒸水代替PCR产物，结果无蓝斑产生，还有我理解你做阴性对照的意思，可是我现在出现的问题和你说的不一样！

你那个平板有抗性的没？你后面转化就是把T载体转入大肠吗？
赞一下(1人) 回复此楼
在等待中涅槃重生
8楼2011-04-22 10:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-22 10:05:16:
你那个平板有抗性的没？你后面转化就是把T载体转入大肠吗？

恩，有抗性的啊，是氨苄青霉素，对，后面转入大肠
赞一下 回复此楼
努力，不抱怨
9楼2011-04-22 16:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yoyoyoyo3985

金虫 (小有名气)
我的蓝白斑筛选出现同样问题，隐性克隆也是白色的……
赞一下 回复此楼
难免埋怨时间的手，把相爱写成相爱过
10楼2011-05-03 13:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jiajunhui 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 6/300 2026-09-02 23:59 by rM1TE0WVDIIY
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 3/150 2026-09-02 22:50 by rM1TE0WVDIIY
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +14 Kittylucky 2026-08-27 15/750 2026-09-02 19:35 by liumei0601
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭