应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蓝白斑筛选出现的问题
51/1返回列表
查看: 2943  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 蓝白斑筛选出现的问题

大家好，我在做蓝白斑筛选的时候使用宝生物的PMD18-T载体，我在做阴性对照的使用灭过菌的双蒸水代替PCR产物与载体连接，可是在平板上长出来的菌都是白斑，我不能理解为什么阴性对照长出来的不是蓝斑都是白斑？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力，不抱怨
1楼 2011-04-21 18:57:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by yuxia82012 at 2011-04-22 10:05:16:
你那个平板有抗性的没？你后面转化就是把T载体转入大肠吗？

恩，有抗性的啊，是氨苄青霉素，对，后面转入大肠
赞一下 回复此楼
努力，不抱怨
9楼2011-04-22 16:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

shandongfmmu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-21 21:16:38

你好！
蓝白筛选，是再涂有IPTG和X-GAL的筛选平板上，重组菌株为白色，未转入重组质粒的是蓝色。所以我猜想既然阴对也是白色，应该是转入质粒了，有可能是载体切割的问题~比如载体没切开，或者是单酶切了~
     祝您成功！
赞一下(1人) 回复此楼
快乐~~~~~~~
2楼2011-04-21 19:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖应助。 2011-04-21 21:16:44
jiajunhui(金币+1): 2011-04-22 09:34:52
jiajunhui(金币+1): 2011-04-22 09:37:00
若是基本不长蓝斑，那请确认IPTG，和X-gal是否有效，使用方法是否正确。

排除T载体有问题，或者操作有问题，可能性不大
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-21 20:05:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 继续努力啊 2011-04-22 09:09:06
1：板子上长出来的全部是白斑不是蓝斑说明连接没什么问题啊，你的目的基因插入到了LacZ上面，当然了你可以进行酶切或者PCR验证滴。。。
2：至于你说你阴性对照的板子上全部是白斑，这个阴性对照的板子上面应该都是蓝斑的，不知道你这个阴性对照是怎么做的？

我认为对照应该是这样：重组载体转化进大肠，然后涂布；阴性对照是空质粒转大肠，涂布。。。。

不知道楼主是如何选对照的？还有你的X-gal是否有问题呢？
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-21 22:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭