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jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 蓝白斑筛选出现的问题

大家好,我在做蓝白斑筛选的时候使用宝生物的PMD18-T载体,我在做阴性对照的使用灭过菌的双蒸水代替PCR产物与载体连接,可是在平板上长出来的菌都是白斑,我不能理解为什么阴性对照长出来的不是蓝斑都是白斑?
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努力,不抱怨
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): 继续努力啊 2011-04-22 09:09:06
1:板子上长出来的全部是白斑不是蓝斑说明连接没什么问题啊,你的目的基因插入到了LacZ上面,当然了你可以进行酶切或者PCR验证滴。。。
2:至于你说你阴性对照的板子上全部是白斑,这个阴性对照的板子上面应该都是蓝斑的,不知道你这个阴性对照是怎么做的?

我认为对照应该是这样:重组载体转化进大肠,然后涂布;阴性对照是空质粒转大肠,涂布。。。。

不知道楼主是如何选对照的?还有你的X-gal是否有问题呢?
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-21 22:54:24
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