应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】单酶切酶和DNA的比例，体系大小的问题
51/1返回列表
查看: 3579  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

starfishfly

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】单酶切酶和DNA的比例，体系大小的问题 已有5人参与

酶切体系是越大越好吗？
为什么我用EcoR I酶切，20ul体系加0.5ul酶的时候效果比200ul体系加2ul酶效果好？
而且昨天用200ul体系切10ul的DNA没有切5ulDNA效果好
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-14 10:58:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starfishfly

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 11:18:58:
1.关于酶切体系：适当增加酶切体系是好的，因为限制性内切酶只有在自己的最适环境里才能完全发挥它的酶切能力，那么这个环境是由buffer来提供的，适当增大酶切体系可以减少因为移液枪精度或是个人操作所引起的实 ...

十分感谢你及时而准确地回复，感觉我自己做了这么久都没有这几句话有用啊~~！！
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-14 11:45:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+6): good 2011-04-14 13:56:58
看你说的效果是指什么了，切割速度？切割是否完全？
一方面，酶切也是化学反应，反应速度当然跟底物浓度相关，而且酶在稀溶液里的稳定性要差，过于稀的话可以考虑加点BSA。
另一方面，DNA纯度也影响切割，一般小提的质粒纯度都很差的，体系大一些相对好
另外EcoR I本身也比较特殊，酶多了不好
不过一般体系大小影响不会很明显，基本上是个人习惯。有的人就习惯用10 uL的小体系，我就不习惯用50 uL以下的体系。在样品、酶质量都好的情况下基本也不会出问题
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-04-14 11:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+5, EPI+1): 最近很给力啊！ 2011-04-14 12:06:23
引用回帖:
Originally posted by starfishfly at 2011-04-14 10:58:50:
酶切体系是越大越好吗？
为什么我用EcoR I酶切，20ul体系加0.5ul酶的时候效果比200ul体系加2ul酶效果好？
而且昨天用200ul体系切10ul的DNA没有切5ulDNA效果好

1.关于酶切体系：适当增加酶切体系是好的，因为限制性内切酶只有在自己的最适环境里才能完全发挥它的酶切能力，那么这个环境是由buffer来提供的，适当增大酶切体系可以减少因为移液枪精度或是个人操作所引起的实验误差，有利于限制性内切酶发挥其最大的酶切活性，但是由于增加酶切体系所随之带来的问题是限制性内切酶在体系当中浓度的降低，使得酶与酶切位点结合的几率也会有一定的下降；所以并非体系越大越好
2.关于酶切体系的确定：酶的用量是由底物的量来确定的，一般来讲1ul酶可以切割1ug的底物（最适条件下，1h）；由酶的量来确定酶切体系的大小，一般1ul酶对应20ul的酶切体系；由酶切体系确定buffer和水的量
3.关于根据酶的用量来确定酶切体系：酶切体系的确立是为了给酶提供一个最适的反应环境。酶都是保存在甘油里的（50%），而较高的甘油浓度对任何限制性内切酶的特异性切割都是不利的（产生星活性），正常情况下把酶稀释10倍后就可以忽略此因素的影响，再结合前面提到的适当增大酶切体系的原则，经过实践证明1ul酶对应20ul的酶切体系是个不错的选择
赞一下(5人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-04-14 11:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starfishfly

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2011-04-14 11:18:58:
1.关于酶切体系：适当增加酶切体系是好的，因为限制性内切酶只有在自己的最适环境里才能完全发挥它的酶切能力，那么这个环境是由buffer来提供的，适当增大酶切体系可以减少因为移液枪精度或是个人操作所引起的实 ...

你好，我还有一个疑问~
平常说“大体系酶切，小体系酶连”这是因为在同等浓度的情况下，酶反应的空间问题吗？大体系有助于酶与DNA各个位点的识别，小体系有助于连接片段间的碰撞？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-04-14 11:49:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266求调剂 +4 阳阳哇塞 2026-03-14 8/400 2026-03-18 12:43 by Linda Hu
[考研] 280求调剂 +6 咕噜晓晓 2026-03-18 7/350 2026-03-18 11:25 by 无际的草原
[考研] 301求调剂 +9 yy要上岸呀 2026-03-17 9/450 2026-03-18 08:58 by 无际的草原
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +6 孔志浩 2026-03-12 11/550 2026-03-17 14:41 by 周舟舟77
[考博] 26申博 +4 八旬速览 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 一志愿，福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 材料与化工 323 英一+数二+物化，一志愿：哈工大 本人本科双一流 +4 自由的_飞翔 2026-03-13 5/250 2026-03-14 19:39 by hmn_wj
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考博] 福州大学杨黄浩课题组招收2026年专业学位博士研究生，2026.03.20截止 +3 Xiangyu_ou 2026-03-12 3/150 2026-03-13 09:36 by duanwu655
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭