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starfishfly

铜虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】单酶切酶和DNA的比例，体系大小的问题已有5人参与

酶切体系是越大越好吗？
为什么我用EcoR I酶切，20ul体系加0.5ul酶的时候效果比200ul体系加2ul酶效果好？
而且昨天用200ul体系切10ul的DNA没有切5ulDNA效果好

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1楼 2011-04-14 10:58:50

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ben1147

木虫 (正式写手)

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dhd997(金币+6): good 2011-04-14 13:56:58

看你说的效果是指什么了，切割速度？切割是否完全？
一方面，酶切也是化学反应，反应速度当然跟底物浓度相关，而且酶在稀溶液里的稳定性要差，过于稀的话可以考虑加点BSA。
另一方面，DNA纯度也影响切割，一般小提的质粒纯度都很差的，体系大一些相对好
另外EcoR I本身也比较特殊，酶多了不好
不过一般体系大小影响不会很明显，基本上是个人习惯。有的人就习惯用10 uL的小体系，我就不习惯用50 uL以下的体系。在样品、酶质量都好的情况下基本也不会出问题

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