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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)

应助: 10 (幼儿园)
金币: 20473.8
帖子: 1109
在线: 61.1小时
虫号: 481086

[交流] 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题

最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造，问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1，酶切位点NdeI(3700,如图在NheI的右侧)，NheI (3840)，请问各位虫友这样连接的话是不是外源的G418基因连接方向是反向的，我是否需要重新合成引物调换酶切位点？谢谢帮忙！

[ Last edited by xtcao668 on 2011-4-13 at 09:02 ]

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1楼 2011-04-12 23:44:19

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wu-ke-da

金虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 955.5
帖子: 206
在线: 64.5小时
虫号: 1781027

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

8楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2014-08-12 11:14:19
请问楼主构建成功了吗？我现在也在这样构建！但没有成功，不知道楼主能否馈赠该质粒呢！谢谢

亲，请问您有pYES2质粒吗？能否赠送一些？

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9楼2015-05-18 15:13:50

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

xtcao668(金币+1): 谢谢交流 2011-04-26 15:21:45

引用回帖:

Originally posted by xtcao668 at 2011-04-12 23:44:19:
最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造，问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1，酶切位 ...

NdeI(3700)在图上没看到呢