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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题
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xtcao668

至尊木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题

最近在做将质粒pYES2 ura3 基因用Nde I 和Nhe I酶切后将G418 基因扩增后连接进行质粒改造， 问题是在设计引物时扩增G418基因上游引物带有NdeI酶切位点，下游带有NheI 酶切位点，如图所示以GAL1启动子为1， 酶切位点NdeI(3700,如图在NheI的右侧)，NheI (3840)，请问各位虫友这样连接的话是不是外源的G418基因连接方向是反向的，我是否需要重新合成引物调换酶切位点？ 谢谢帮忙！


[ Last edited by xtcao668 on 2011-4-13 at 09:02 ]
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1楼 2011-04-12 23:44:19
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jiaoxiayoulu

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引用回帖:
5楼: Originally posted by haiyanli111 at 2013-06-17 09:30:00
你好！我也遇到了前面那位的问题，你说的表达元件是什么意思，我构建的时候直接在起始密码子和终止密码子前后加的酶切位点，这样是一个基因吧！谢谢指教！...

太复杂了，直接把两个LOXP一起弄进去就得了
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7楼2014-06-23 10:20:33
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
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请问楼主构建成功了吗？我现在也在这样构建！但没有成功，不知道楼主能否馈赠该质粒呢！谢谢
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8楼2014-08-12 11:14:19
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