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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物化学 » 【求助】样品出峰时间大概在30多分钟。但是基线漂移很严重？
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助】样品出峰时间大概在30多分钟。但是基线漂移很严重？已有7人参与

在用HPLC-UV分析 isospinosin,,, spinosin  。首先，这两个化合物是7位和8位的取代基位置互换，其他都一样。在甲醇-水流动相中能分离开，洗脱梯度为70%aq-0；时间为 0-60min，出峰时间大概在30多分钟。但是基线漂移很严重。换乙腈-水后，怎么也分不开。怎么办？？？
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1楼2011-03-28 00:27:16
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hyyyzyq

银虫 (小有名气)
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dream意(金币+1): 2011-03-28 10:44:38
1.基线漂移严重的原因可能是进样之前流动相没有平衡好，也有可能是梯度洗脱过程中压力不稳定导致的基线漂移
2.你的乙腈和水的比例是多少呢
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2楼2011-03-28 09:59:26
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luojin7653

银虫 (正式写手)
基线漂移可以解决的..多平衡一下吧...
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今晚打老虎
3楼2011-03-28 10:23:23
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xiaodu2007693

木虫 (著名写手)

药学版~龙猫
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢！ 2011-03-28 13:21:48
洗脱梯度为70%aq-0；时间为 0-60min？
你从水一直到70%，60分钟跑完是吗？
如果是的话，别从水开始，20%也行啊，梯度变得慢一点
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欢迎您来药学版~
4楼2011-03-28 12:11:07
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柳酚咖敏

银虫 (小有名气)
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xiaodu2007693(金币+1): 谢谢交流 2011-04-01 20:13:05
你的样品是不是只有这两个物质出峰啊，如果只是两个物质混合的话，这个梯度设计很有问题啊，
两个东西30分钟都能出峰的话，就没必要再继续让梯度走下去了呀；而且你没必要把初始有机相比例设得那么低。用甲醇-水走梯度，基线漂是正常的。
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桂棹兮兰桨，击空明兮溯流光。渺渺兮于怀，望美人兮天一方-
5楼2011-03-28 17:24:21
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hyyyzyq at 2011-03-28 09:59:26:
1.基线漂移严重的原因可能是进样之前流动相没有平衡好，也有可能是梯度洗脱过程中压力不稳定导致的基线漂移
2.你的乙腈和水的比例是多少呢

首先很感谢朋友的积极建议。 由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。 基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。 为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰 时间24min左右，分离度0.5， 不能完全分离， 于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.
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6楼2011-04-01 19:54:39
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by luojin7653 at 2011-03-28 10:23:23:
基线漂移可以解决的..多平衡一下吧...

首先很感谢朋友的积极建议。 由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。 基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。 为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰 时间24min左右，分离度0.5， 不能完全分离， 于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.
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7楼2011-04-01 19:54:48
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laoyisng1122

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by xiaodu2007693 at 2011-03-28 12:11:07:
洗脱梯度为70%aq-0；时间为 0-60min？
你从水一直到70%，60分钟跑完是吗？
如果是的话，别从水开始，20%也行啊，梯度变得慢一点

首先很感谢朋友的积极建议。 由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。 基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。 为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰 时间24min左右，分离度0.5， 不能完全分离， 于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.
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8楼2011-04-01 19:54:56
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laoyisng1122

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Originally posted by 柳酚咖敏 at 2011-03-28 17:24:21:
你的样品是不是只有这两个物质出峰啊，如果只是两个物质混合的话，这个梯度设计很有问题啊，
两个东西30分钟都能出峰的话，就没必要再继续让梯度走下去了呀；而且你没必要把初始有机相比例设得那么低。用甲醇-水 ...

首先很感谢朋友的积极建议。 由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。接着就是30min多分钟出现好多峰，有很严重重叠，其中isospinosin ,spinosin就是在这里，但是分开了。然后50多分钟出现的jujubosideA也是需要的。所以，样品中需要测的化合物极性好像差别比较大。 基线漂移，我估计是因为梯度比较陡。所以换成乙腈和水系统。 为了摸索isospinosin ,spinosin 分离的条件，就这两个化合物进样，梯度范围为25％乙腈－50％乙腈，0-30min, 出峰 时间24min左右，分离度0.5， 不能完全分离， 于是降低乙腈浓度，为20％乙腈－50％乙腈，时间不变，结果分离度差不多。出峰时间延长接近30min.
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9楼2011-04-01 19:55:13
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柳酚咖敏

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Originally posted by laoyisng1122 at 2011-04-01 19:55:13:
首先很感谢朋友的积极建议。 由于我的样品至少需要检测5个峰以上，所以，检测范围比较宽。用70％水：30甲醇－0％水：100％甲醇，时间：0－60min。大概10min左右出的第一个峰是需要的，然后20min左右是第二个峰。 ...

如果你要分离的两个化合物是异构体的话，甚至手型异构体，那这个方法可能很不好建立。
即使你能勉强做到基线分离，可能方法的耐用性也要打折扣的。
手性拆分，还是手性柱给力啊！
祝好运！
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桂棹兮兰桨，击空明兮溯流光。渺渺兮于怀，望美人兮天一方-
10楼2011-04-02 10:35:01
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