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木樨mx

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助】用三氯醋酸处理样品后,基线漂移,着急~~ 已有3人参与

请教各位老师:
       血液样品用三氯醋酸沉淀蛋白,进样后基线漂的特别厉害。
       分析物为生物碱,反相c18,检测波长为210nm,流动相乙腈:0.1%磷酸(三乙胺调oh3.5)5:95,等度洗脱。

       是不是跟三氯醋酸处理方法有关?采用1%,10%分别处理样品,都存在这个问题,是不是处理后的样品ph太低,柱子承受不了?

       之前采用别的前处理方法如液液萃取时并没有漂移的现象。
       是不是跟检测波长低有关?因为样品要批量处理,进一个样平衡一次貌似也不是很现实,特求助于各位老师,望不吝指教。

       多谢~~





[ Last edited by 木樨mx on 2010-5-15 at 16:51 ]
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冷冰雨

银虫 (小有名气)

木樨mx(金币+1):呵呵,谢谢帮顶,能给点意见更好~ 2010-05-15 16:09:54
顶顶
2楼2010-05-15 16:05:57
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xuwen78

禁虫 (小有名气)


westzilch(金币+1):谢谢交流! 2010-05-16 18:58:34
木樨mx(金币+5):谢谢 2010-05-17 21:49:55
本帖内容被屏蔽

3楼2010-05-16 11:26:03
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木樨mx

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by xuwen78 at 2010-05-16 11:26:03:
楼主用的色谱柱的柱长和流速是多少?210nm的波长下血浆样品中很多杂质都会出峰,而且沉淀蛋白的样品很脏,所以一般前5min左右出很多杂质峰是正常的,但是楼主的色谱峰有点怪,楼主可以试一下把样品加点碱中和一下 ...

柱长25cm的,流速是1ml/min  
应该是三氯醋酸的问题,就算我用进一针平衡一次的方法基线仍然漂移,当然比传上的图堪入目多了,可能就是因为三氯醋酸在低波长下噪音太厉害了吧,加碱中和了之后也没太大改善,应该是得放弃这种处理方法了吧。
不过,很谢谢~~
4楼2010-05-17 21:49:35
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