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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 为什么液相色谱基线严重漂移？
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zxtcm

金虫 (初入文坛)

[交流] 为什么液相色谱基线严重漂移？已有12人参与

情况是这样的：是摸好的条件，对照品和以前的样品没有发生这种情况。

样品使用50%乙醇溶解，流动相为水-乙腈-0.1%甲酸（两相均加），梯度洗脱，从13%的乙腈到60%的乙腈，基线出现上移时即为梯度变化的地方。波长270nm。angilent1260，自动进样，柱温30度。c-18柱15cm。

①怀疑是有色素干扰，但是之前的样品完全没有漂移。

②怀疑检测器灯能量不足，更换后没有变化。

③怀疑预柱问题，拆除预柱没有变化。

④不可能使流动相梯度问题，对照品没有问题。但如果跑完样品在跑对照品会漂。

⑤怀疑色谱柱，更换安捷伦柱第一针没有漂，第二针又出现漂移。

⑥样品澄清，应该没有叶绿素。
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1楼2011-07-19 18:00:12
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干一行爱一行

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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pplover(金币+2): 合理的建议1。鼓励新虫交流1。。 2011-07-23 20:02:58
有没有可能是这批的PH有问题啊？你做了那么多的排除工作，换一台仪器做，如果还是这样，就只有是样品问题了。
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超越一切想超越的人！
2楼2011-07-19 18:39:14
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57revival

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
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pplover(金币+3): 感谢交流。。。 2011-07-23 20:02:29
你做对照的时候都没问题，但做完样品再做对照基线就飘了。所以我觉得应该是样品的问题，楼上说的PH可以考虑哈，但是你说条件都是摸好了都嘛，PH应该考虑在内了。我看你的图谱，响应值怎么这么低，根本没出峰嘛，都40多min了。一般基线飘可能会是：1、柱压不稳。2、柱子不干净了，有杂质。3、柱效降低，基本没柱效。4、柱温箱温度异常。5、泵液不均，可手动测一下泵的精确度。
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海纳百川，有容乃大；壁立千仞，无欲则刚。
3楼2011-07-19 20:55:56
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zxtcm

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 干一行爱一行 at 2011-07-19 18:39:14:
有没有可能是这批的PH有问题啊？你做了那么多的排除工作，换一台仪器做，如果还是这样，就只有是样品问题了。

你是说样品的pH值吗？可能性不大，因为就算是pH值变化了，可能出峰时间面积之类会变化，但基线无论如何不会漂成这样。

我一直怀疑有脂溶性色素干扰，在有机相浓度加大时，被洗脱，出现“吸收包”，随后有回落，下一个梯度出现，有机相浓度再次加大，再出现下一个吸收包，随后回落。但是问题是之前的样品没有这种情况，而且是连续进样，两针见有5min初始浓度流动相的平衡。真是见鬼了。

[ Last edited by zxtcm on 2011-7-20 at 14:37 ]
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4楼2011-07-19 20:59:12
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zxtcm

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 57revival at 2011-07-19 20:55:56:
你做对照的时候都没问题，但做完样品再做对照基线就飘了。所以我觉得应该是样品的问题，楼上说的PH可以考虑哈，但是你说条件都是摸好了都嘛，PH应该考虑在内了。我看你的图谱，响应值怎么这么低，根本没出峰嘛，都 ...

非常感谢57revival 兄的分析，几条原因都是HPLC中常遇到的问题，没有大量的一线实验工作不可能清晰的知道这些的。

贴的图谱是没有成分峰出现，但其它图谱基线都是这样的。

1、“柱压不稳。”可以排除，安捷伦柱压记录显示柱压平稳。

2、“柱子不干净了，有杂质。”可以排除，每次用前和用后均用甲醇洗柱，第一针对照品不会漂。但是如果样品杂质发生变化，是不是会有不在c18柱上成峰的成分干扰？比如非极性的色素？

3、“柱效降低，基本没柱效。”柱效降低是有可能的，流动相里有0.1%甲酸，长期使用柱效肯定下降。但是对比现在与之前出峰时间基本一样，不至于没有柱效。
用完先90%的水冲再甲醇冲，后来就只用甲醇冲不知合不合适。用前甲醇30min，然后流动相平衡至基线稳定。

4、“柱温箱温度异常。”可以排除，柱温显示误差小于0.1°C。

5、“泵液不均，可手动测一下泵的精确度。”这个没有测过，曾经有同学发现AB通道出现出峰时间变化过大的现象，换CD通道就好了。如果出峰时间变化不大，泵液应该是准的。
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5楼2011-07-20 15:21:54
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tshcdm

金虫 (小有名气)
★
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您的梯度时间是多少？
用得水是否有其他离子干扰？
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6楼2011-07-20 16:06:50
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zxtcm

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by tshcdm at 2011-07-20 16:06:50:
您的梯度时间是多少？
用得水是否有其他离子干扰？

分别在11min、22min和30min变化梯度

水用的是娃哈哈纯净水，加酸后0.45μm过滤。
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7楼2011-07-21 10:08:38
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lrh1983

木虫 (正式写手)
★
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换换水吧，哇哈哈假货多。你的样品处理过程是怎么样的，没有污染吗？
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8楼2011-07-21 10:29:24
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zxtcm

金虫 (初入文坛)
昨天晚上试用了另一台液相，发现混合对照品漂移同样严重，且在梯度最后时段突然出现极高的色谱峰。乙腈接近60%的样子。做了2针，第2针好了很多，但最后还是有不明色谱峰出现。

看来是柱子柱效损失严重，或者存储了大量非极性杂质甲醇和乙腈均无法完全冲洗干净。不知能不能用更低极性的溶剂冲洗？

[ Last edited by zxtcm on 2011-7-21 at 11:09 ]
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9楼2011-07-21 10:46:04
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zxtcm

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by lrh1983 at 2011-07-21 10:29:24:
换换水吧，哇哈哈假货多。你的样品处理过程是怎么样的，没有污染吗？

娃哈哈是学校统一买的假的可能性比较小。

样品是水溶液，取5ml加无水乙醇定容至10ml，使变为50%的乙醇溶液，混匀，过0.45μm膜，膜赌得比较厉害，基本只能滤2-3个样品。

这种样品制备方法不知是否合理，因为之前有蒸干转溶的制法，但总感觉那样会有损失。
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10楼2011-07-21 10:57:58
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