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caijhua

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[交流] 【求助/交流】荧光定量融解曲线怪异已有5人参与

融解曲线有突峰，是什么原因？请各位大侠指点！
前面两张图为正常的融解曲线图跟融解峰图，但后面两张就出现了不正常，融解曲线有突起！

[ Last edited by caijhua on 2011-3-24 at 15:20 ]

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1楼 2011-03-24 15:16:59

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西瓜

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amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 19:59:48

a415398462 同志把主要可能原因都说了。我只说说自己的看法。
你的杂峰出现在主峰之后，不像引物二聚体的杂峰（一般出现在70多度），可能出现非特异扩增。可以通过提高退火温度，减少延伸时间来增加反应的特异性。
如果和前面正常的图用的是同一对引物，那就是某次反应的问题了。可保持PCR程序、体系不变，更换模板、引物、试剂等，看看能不能找出问题。
如果正常的和出问题的两次PCR用的模板一样，我建议你先重新稀释引物。