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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】荧光定量融解曲线怪异
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caijhua

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】荧光定量融解曲线怪异 已有5人参与

融解曲线有突峰，是什么原因？请各位大侠指点！
前面两张图为正常的融解曲线图跟融解峰图，但后面两张就出现了不正常，融解曲线有突起！









[ Last edited by caijhua on 2011-3-24 at 15:20 ]
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1楼 2011-03-24 15:16:59
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
融解曲线出现杂峰是常见问题，售后说没碰到过说明他们不懂行，靠不住呢。
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6楼2011-03-24 18:19:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 19:59:48
a415398462 同志把主要可能原因都说了。我只说说自己的看法。
你的杂峰出现在主峰之后，不像引物二聚体的杂峰（一般出现在70多度），可能出现非特异扩增。可以通过提高退火温度，减少延伸时间来增加反应的特异性。
如果和前面正常的图用的是同一对引物，那就是某次反应的问题了。可保持PCR程序、体系不变，更换模板、引物、试剂等，看看能不能找出问题。
如果正常的和出问题的两次PCR用的模板一样，我建议你先重新稀释引物。
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7楼2011-03-24 18:27:15
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