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caijhua

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】荧光定量融解曲线怪异 已有5人参与

融解曲线有突峰,是什么原因?请各位大侠指点!
前面两张图为正常的融解曲线图跟融解峰图,但后面两张就出现了不正常,融解曲线有突起!









[ Last edited by caijhua on 2011-3-24 at 15:20 ]
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5): 鼓励新虫发帖交流。 2011-03-24 19:59:24
同问。帮忙顶一下。
2楼2011-03-24 15:28:33
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vcvcvc

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一个data?问问PCR仪的售后吧,是不是软件算法的问题
3楼2011-03-24 15:38:03
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caijhua

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by vcvcvc at 2011-03-24 15:38:03:
一个data?问问PCR仪的售后吧,是不是软件算法的问题

他们就回复说还没遇到过这问题。让换些耗材试试,下午换了耗材跑,再跑出这样的结果让他们过来修仪器
4楼2011-03-24 15:49:48
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a415398462

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 19:59:43
溶解曲线不止一个主峰

1、引物设计不佳:避免二聚体和发夹结构的出现;
2、引物浓度不佳:适当调整引物浓度;
3、退火温度低:提高退火温度;
4、镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度;
5、模板中有基因组的污染:通过引物设计避免非特异扩增。
5楼2011-03-24 17:20:07
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
融解曲线出现杂峰是常见问题,售后说没碰到过说明他们不懂行,靠不住呢。
6楼2011-03-24 18:19:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 19:59:48
a415398462 同志把主要可能原因都说了。我只说说自己的看法。
你的杂峰出现在主峰之后,不像引物二聚体的杂峰(一般出现在70多度),可能出现非特异扩增。可以通过提高退火温度,减少延伸时间来增加反应的特异性。
如果和前面正常的图用的是同一对引物,那就是某次反应的问题了。可保持PCR程序、体系不变,更换模板、引物、试剂等,看看能不能找出问题。
如果正常的和出问题的两次PCR用的模板一样,我建议你先重新稀释引物。
7楼2011-03-24 18:27:15
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