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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】荧光定量融解曲线怪异
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caijhua

铜虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】荧光定量融解曲线怪异 已有5人参与

融解曲线有突峰，是什么原因？请各位大侠指点！
前面两张图为正常的融解曲线图跟融解峰图，但后面两张就出现了不正常，融解曲线有突起！









[ Last edited by caijhua on 2011-3-24 at 15:20 ]
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1楼 2011-03-24 15:16:59
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+5): 鼓励新虫发帖交流。 2011-03-24 19:59:24
同问。帮忙顶一下。
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2楼2011-03-24 15:28:33
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vcvcvc

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一个data？问问PCR仪的售后吧，是不是软件算法的问题
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3楼2011-03-24 15:38:03
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caijhua

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by vcvcvc at 2011-03-24 15:38:03:
一个data？问问PCR仪的售后吧，是不是软件算法的问题

他们就回复说还没遇到过这问题。让换些耗材试试，下午换了耗材跑，再跑出这样的结果让他们过来修仪器
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-24 15:49:48
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a415398462

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 19:59:43
溶解曲线不止一个主峰

1、引物设计不佳：避免二聚体和发夹结构的出现；
2、引物浓度不佳：适当调整引物浓度；
3、退火温度低：提高退火温度；
4、镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度；
5、模板中有基因组的污染：通过引物设计避免非特异扩增。
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5楼2011-03-24 17:20:07
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
融解曲线出现杂峰是常见问题，售后说没碰到过说明他们不懂行，靠不住呢。
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6楼2011-03-24 18:19:05
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-03-24 19:59:48
a415398462 同志把主要可能原因都说了。我只说说自己的看法。
你的杂峰出现在主峰之后，不像引物二聚体的杂峰（一般出现在70多度），可能出现非特异扩增。可以通过提高退火温度，减少延伸时间来增加反应的特异性。
如果和前面正常的图用的是同一对引物，那就是某次反应的问题了。可保持PCR程序、体系不变，更换模板、引物、试剂等，看看能不能找出问题。
如果正常的和出问题的两次PCR用的模板一样，我建议你先重新稀释引物。
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7楼2011-03-24 18:27:15
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