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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家酶切的体系都是什么样的呢？
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大家酶切的体系都是什么样的呢？

每个实验室，甚至每个实验者都有自己的酶切体系，大家的酶切体系是什么样的呢？
多少体积？组成？818吧
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1楼 2011-03-01 16:17:18
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-01 18:41:39
amisking(金币+2): 辛苦。 2011-03-01 19:34:51
我喜欢用30ul的体系

n ul PCR产物或者 DNA

1ul 酶I

1ul 酶II

3ul 10* buffer

ddH2O 补足

这个体积算是适中吧，做回收的话胶倒厚一点一个孔就装下了。

体系也不至于小到PCR产物或DAN中的杂七乱八的东西抑制酶切。
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2楼2011-03-01 17:48:13
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励参与交流~~~ 2011-03-01 22:39:33
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:26
看你需要切什么东东啊，以及后续是干嘛用的，如果是验证质粒，20就够了，有时候用10微升的都没问题。但是要是切基因组的话，一般要用大体系（不少于50），而且基因组最好用黄枪尖（200微升）吸取。
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3楼2011-03-01 21:40:24
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:47
20-100微升的酶切体系都做过，

酶的量0.5-2微升也试过
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4楼2011-03-01 22:40:32
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翱宇

禁虫 (正式写手)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:35
我一般是用50ul的体系：
质粒加20-30ul
buffer    5ul
酶为    1.5-2ul
加BSA和水补足体系

但如有时要经过多次酶切、补平，则最开始的体系要大一些，80-100ul也可以，质粒多一些！
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5楼2011-03-01 22:47:32
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magy2006

木虫 (著名写手)
都这么有经验啊……呵呵
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6楼2011-03-02 08:00:16
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walker2898

银虫 (小有名气)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:54:00
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 21:54:04
10微升即可，酶用0.2微升，质粒1.5微升，buffer1微升，这是大肠的质粒验证，多了也浪费。
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7楼2011-03-02 09:48:31
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