应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大家酶切的体系都是什么样的呢？
51/1返回列表
查看: 927  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】大家酶切的体系都是什么样的呢？

每个实验室，甚至每个实验者都有自己的酶切体系，大家的酶切体系是什么样的呢？
多少体积？组成？818吧
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-01 16:17:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:47
20-100微升的酶切体系都做过，

酶的量0.5-2微升也试过
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-01 22:40:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★ ★
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-01 18:41:39
amisking(金币+2): 辛苦。 2011-03-01 19:34:51
我喜欢用30ul的体系

n ul PCR产物或者 DNA

1ul 酶I

1ul 酶II

3ul 10* buffer

ddH2O 补足

这个体积算是适中吧，做回收的话胶倒厚一点一个孔就装下了。

体系也不至于小到PCR产物或DAN中的杂七乱八的东西抑制酶切。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-01 17:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励参与交流~~~ 2011-03-01 22:39:33
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:26
看你需要切什么东东啊，以及后续是干嘛用的，如果是验证质粒，20就够了，有时候用10微升的都没问题。但是要是切基因组的话，一般要用大体系（不少于50），而且基因组最好用黄枪尖（200微升）吸取。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-03-01 21:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:35
我一般是用50ul的体系：
质粒加20-30ul
buffer    5ul
酶为    1.5-2ul
加BSA和水补足体系

但如有时要经过多次酶切、补平，则最开始的体系要大一些，80-100ul也可以，质粒多一些！
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-01 22:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭