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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaoyu1014126

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】大家酶切的体系都是什么样的呢?

每个实验室,甚至每个实验者都有自己的酶切体系,大家的酶切体系是什么样的呢?
多少体积?组成?818吧
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★ ★
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-01 18:41:39
amisking(金币+2): 辛苦。 2011-03-01 19:34:51
我喜欢用30ul的体系

n ul PCR产物或者 DNA

1ul 酶I

1ul 酶II

3ul 10* buffer

ddH2O 补足

这个体积算是适中吧,做回收的话胶倒厚一点一个孔就装下了。

体系也不至于小到PCR产物或DAN中的杂七乱八的东西抑制酶切。
2楼2011-03-01 17:48:13
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wanghuiyanyx

金虫 (著名写手)



rainwander(金币+1): 鼓励参与交流~~~ 2011-03-01 22:39:33
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:26
看你需要切什么东东啊,以及后续是干嘛用的,如果是验证质粒,20就够了,有时候用10微升的都没问题。但是要是切基因组的话,一般要用大体系(不少于50),而且基因组最好用黄枪尖(200微升)吸取。
3楼2011-03-01 21:40:24
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)


xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:47
20-100微升的酶切体系都做过,

酶的量0.5-2微升也试过
4楼2011-03-01 22:40:32
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翱宇

禁虫 (正式写手)


xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:53:35
我一般是用50ul的体系:
质粒加20-30ul
buffer    5ul
酶为    1.5-2ul
加BSA和水补足体系

但如有时要经过多次酶切、补平,则最开始的体系要大一些,80-100ul也可以,质粒多一些!
5楼2011-03-01 22:47:32
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magy2006

木虫 (著名写手)


都这么有经验啊……呵呵
6楼2011-03-02 08:00:16
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walker2898

银虫 (小有名气)


xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 11:54:00
xiaoyu1014126(金币+1): 2011-03-02 21:54:04
10微升即可,酶用0.2微升,质粒1.5微升,buffer1微升,这是大肠的质粒验证,多了也浪费。
7楼2011-03-02 09:48:31
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