应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】启动子构建！！！！
91/1返回列表
查看: 880  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】启动子构建！！！！

各位虫友，紧急救助！
     最近一直在构建启动子，连接（连接效率很低很低）酶切都切出来了的，可是测序结果根本就不匹配。这是为什么，是哪里出了问题？？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-19 11:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
睡着数绵羊(金币+1): 2011-02-19 12:18:49
翱宇(金币+1): 谢谢交流 2011-02-19 12:21:32

非特异PCR？换引物试试
连接效率低可能是酶挂了，或者放太久buffer的ATP挂了（我挂了…………）
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-02-19 12:03:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 04:03:00:
非特异PCR？换引物试试
连接效率低可能是酶挂了，或者放太久buffer的ATP挂了（我挂了…………）

可是P出的条带很清晰，在目的片段大小处就一条带的，酶都是新的！
赞一下 回复此楼
3楼2011-02-19 12:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2): 值得参考 2011-02-19 12:34:15
睡着数绵羊(金币+1): 2011-02-19 18:06:54

其实一个实验的失败有很多原因，不知楼主是怎样连接的，粘性末端，还是平末端，还是一平一粘。粘性末端的话，建议假如水，载体和片段后65度温育10分钟，中间弹几次，然后放冰上2分钟，使得粘性末端自身的搭配被打开，然后加入buffer和酶，16度连接几小时。另外可以的话建议买感受态做转化，人家做的转化效率就是高，可以试试呢。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-02-19 12:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-02-19 04:21:11:
可是P出的条带很清晰，在目的片段大小处就一条带的，酶都是新的！

有没有试过P完之后直接测序
或者先连T再测
赞一下 回复此楼
5楼2011-02-19 13:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-02-19 04:24:28:
其实一个实验的失败有很多原因，不知楼主是怎样连接的，粘性末端，还是平末端，还是一平一粘。粘性末端的话，建议假如水，载体和片段后65度温育10分钟，中间弹几次，然后放冰上2分钟，使得粘性末端自身的搭配被打 ...

虽说连接效率低，可还是连上了，但是测序就不对
赞一下 回复此楼
6楼2011-02-19 18:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 05:20:05:
有没有试过P完之后直接测序
或者先连T再测

这个到没有，是不是说可能P出的片段就不对，是吗，可是在那个位置上P出来就是一条带啊。
赞一下 回复此楼
7楼2011-02-19 18:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-02-19 10:06:29:
这个到没有，是不是说可能P出的片段就不对，是吗，可是在那个位置上P出来就是一条带啊。

走夜路多了也会撞鬼的……
赞一下 回复此楼
8楼2011-02-19 18:07:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
睡着数绵羊9楼
2011-02-19 18:19   回复  
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 10:07:45: 走夜路多了也会撞鬼的……

相关版块跳转 我要订阅楼主 睡着数绵羊 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭