应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】启动子构建！！！！
91/1返回列表
查看: 707  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】启动子构建！！！！

各位虫友，紧急救助！
     最近一直在构建启动子，连接（连接效率很低很低）酶切都切出来了的，可是测序结果根本就不匹配。这是为什么，是哪里出了问题？？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-19 11:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
睡着数绵羊(金币+1): 2011-02-19 12:18:49
翱宇(金币+1): 谢谢交流 2011-02-19 12:21:32

非特异PCR？换引物试试
连接效率低可能是酶挂了，或者放太久buffer的ATP挂了（我挂了…………）
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-02-19 12:03:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 04:03:00:
非特异PCR？换引物试试
连接效率低可能是酶挂了，或者放太久buffer的ATP挂了（我挂了…………）

可是P出的条带很清晰，在目的片段大小处就一条带的，酶都是新的！
赞一下 回复此楼
3楼2011-02-19 12:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2): 值得参考 2011-02-19 12:34:15
睡着数绵羊(金币+1): 2011-02-19 18:06:54

其实一个实验的失败有很多原因，不知楼主是怎样连接的，粘性末端，还是平末端，还是一平一粘。粘性末端的话，建议假如水，载体和片段后65度温育10分钟，中间弹几次，然后放冰上2分钟，使得粘性末端自身的搭配被打开，然后加入buffer和酶，16度连接几小时。另外可以的话建议买感受态做转化，人家做的转化效率就是高，可以试试呢。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-02-19 12:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-02-19 04:21:11:
可是P出的条带很清晰，在目的片段大小处就一条带的，酶都是新的！

有没有试过P完之后直接测序
或者先连T再测
赞一下 回复此楼
5楼2011-02-19 13:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 翱宇 at 2011-02-19 04:24:28:
其实一个实验的失败有很多原因，不知楼主是怎样连接的，粘性末端，还是平末端，还是一平一粘。粘性末端的话，建议假如水，载体和片段后65度温育10分钟，中间弹几次，然后放冰上2分钟，使得粘性末端自身的搭配被打 ...

虽说连接效率低，可还是连上了，但是测序就不对
赞一下 回复此楼
6楼2011-02-19 18:05:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 05:20:05:
有没有试过P完之后直接测序
或者先连T再测

这个到没有，是不是说可能P出的片段就不对，是吗，可是在那个位置上P出来就是一条带啊。
赞一下 回复此楼
7楼2011-02-19 18:06:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-02-19 10:06:29:
这个到没有，是不是说可能P出的片段就不对，是吗，可是在那个位置上P出来就是一条带啊。

走夜路多了也会撞鬼的……
赞一下 回复此楼
8楼2011-02-19 18:07:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
睡着数绵羊9楼
2011-02-19 18:19   回复  
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 10:07:45: 走夜路多了也会撞鬼的……

相关版块跳转 我要订阅楼主 睡着数绵羊 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 309求调剂 +5 花与叶@ 2026-03-10 5/250 2026-03-16 14:13 by 哦哦123
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +7 超级伊昂大王 2026-03-10 7/350 2026-03-14 00:49 by JourneyLucky
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 程雨杭 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:06 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭