应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】启动子构建！！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 730  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】启动子构建！！！！

各位虫友，紧急救助！
     最近一直在构建启动子，连接（连接效率很低很低）酶切都切出来了的，可是测序结果根本就不匹配。这是为什么，是哪里出了问题？？？？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-02-19 11:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睡着数绵羊

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 04:03:00:
非特异PCR？换引物试试
连接效率低可能是酶挂了，或者放太久buffer的ATP挂了（我挂了…………）

可是P出的条带很清晰，在目的片段大小处就一条带的，酶都是新的！
赞一下 回复此楼
3楼2011-02-19 12:21:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
睡着数绵羊(金币+1): 2011-02-19 12:18:49
翱宇(金币+1): 谢谢交流 2011-02-19 12:21:32

非特异PCR？换引物试试
连接效率低可能是酶挂了，或者放太久buffer的ATP挂了（我挂了…………）
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-02-19 12:03:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

翱宇

禁虫 (正式写手)
★ ★
1949stone(金币+2): 值得参考 2011-02-19 12:34:15
睡着数绵羊(金币+1): 2011-02-19 18:06:54

其实一个实验的失败有很多原因，不知楼主是怎样连接的，粘性末端，还是平末端，还是一平一粘。粘性末端的话，建议假如水，载体和片段后65度温育10分钟，中间弹几次，然后放冰上2分钟，使得粘性末端自身的搭配被打开，然后加入buffer和酶，16度连接几小时。另外可以的话建议买感受态做转化，人家做的转化效率就是高，可以试试呢。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-02-19 12:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by 睡着数绵羊 at 2011-02-19 04:21:11:
可是P出的条带很清晰，在目的片段大小处就一条带的，酶都是新的！

有没有试过P完之后直接测序
或者先连T再测
赞一下 回复此楼
5楼2011-02-19 13:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
睡着数绵羊9楼
2011-02-19 18:19   回复  
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-02-19 10:07:45: 走夜路多了也会撞鬼的……

查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 华南理工0703化学，总分336求调剂 +10 手机用户 2026-04-03 11/550 2026-04-06 22:20 by michael2011
[考研] 一志愿郑州大学材料与化工085600，求调剂 +27 吃的不少 2026-04-02 27/1350 2026-04-06 15:19 by 495374996
[考研] 275求调剂 +16 waltzh 2026-04-01 16/800 2026-04-05 17:14 by Hdyxbekcb
[考研] 270求调剂 +9 小杰pp 2026-03-31 11/550 2026-04-05 11:02 by 风雨无晴
[考研] 272求调剂 +4 电气李 2026-04-05 4/200 2026-04-05 10:41 by lbsjt
[考研] 环境285分，过六级，求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 材料与化工306分找调剂 +23 沧海轻舟e 2026-04-02 27/1350 2026-04-04 21:52 by laoshidan
[考研] 363求调剂 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:13 by dongzh2009
[考研] 一志愿武理材料工程302调剂环化或化工 +19 Doleres 2026-03-31 20/1000 2026-04-04 16:44 by 啊俊！
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 366求调剂 +7 sbdnd 2026-04-03 7/350 2026-04-03 12:40 by cymywx
[考研] 302求调剂 +9 zyx上岸！ 2026-04-02 9/450 2026-04-02 23:07 by 马儿快快地跑
[考研] 321求调剂 一志愿 浙江工业大学生物医药 +5 嘿嘿HC 2026-04-01 6/300 2026-04-02 15:23 by sophie2180
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[硕博家园] 考研调剂 +5 骆驼男人 2026-04-01 5/250 2026-04-01 14:28 by syjjj0321
[考研] 材料调剂 +10 Eujd1 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:23 by ivanqyq
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭