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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】启动子构建！！！！

各位虫友，紧急救助！
最近一直在构建启动子，连接（连接效率很低很低）酶切都切出来了的，可是测序结果根本就不匹配。这是为什么，是哪里出了问题？？？？

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1楼 2011-02-19 11:53:11

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翱宇

禁虫 (正式写手)

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★ ★
1949stone(金币+2): 值得参考 2011-02-19 12:34:15
睡着数绵羊(金币+1): 2011-02-19 18:06:54

其实一个实验的失败有很多原因，不知楼主是怎样连接的，粘性末端，还是平末端，还是一平一粘。粘性末端的话，建议假如水，载体和片段后65度温育10分钟，中间弹几次，然后放冰上2分钟，使得粘性末端自身的搭配被打开，然后加入buffer和酶，16度连接几小时。另外可以的话建议买感受态做转化，人家做的转化效率就是高，可以试试呢。