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暗夜懒猫

银虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】PCR电泳结果疑问

试验中用pmd-19载体连接2kb的目的片段，转入感受态大肠杆菌，菌液长起后涂带有氨苄抗性的LB板，有菌落长出，挑取菌落接于带氨苄抗性的液体LB培养基中，待菌长起后取菌液直接做PCR扩增目的条带，但电泳图却显示无目的条带，有的只是200bp的非目的条带，不知原因何在，难道在抗性板上长出的都是假阳性菌，请高人指点！

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1楼 2011-01-08 15:29:32

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shaquila

金虫 (正式写手)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

如果是假阳性，多挑几个克隆，挑菌体pcr也行，但不会影响结果，而且如果不保菌那也没意义，如果不想重做转化，就在挑至少20个克隆试试。下次做的时候注意可以不用加水，全部加insert，还是不行换试剂盒吧，我之前用BIOTECK的T载体(仿TAKARA的)，阳性率100%，这和酶以及体系有关系。之前做过对照实验，用不同浓度18t不加片段进行连接转化，自连频率和载体浓度有关