应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR反应体系请教！
51/1返回列表
查看: 1668  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hnndpt

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR反应体系请教！ 已有10人参与

最近在扩增基因，用如下程序，扩好多次都没结果，只有引物2聚体，大家帮看下反应程序有无问题。
   
                    水： 12.2微升
                    10*buffer： 2微升
                    DNTP:2微升
                    引物F（5PM）: 0.8微升
                      引物R（5PM）: 0.8微升
                       Taq:  0.2微升
                       CDNA模板：2微升
早上来老板说酶加少了，应该加2微升，引物应该提高到4微升。排队等PCR仪中，哪位高人看下，体系还有什么需要优化的？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-12-27 09:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hclcarl

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hnndpt at 2010-12-27 09:18:21:
最近在扩增基因，用如下程序，扩好多次都没结果，只有引物2聚体，大家帮看下反应程序有无问题。
   
                    水： 12.2微升
                    10*buffer： 2微升
                    DNTP:2微 ...

应该把各种组分的浓度加上吧 我们实验室用的是宝生物的Taq酶 25ul的体系加0.125ul的Taq酶
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-12-27 10:13:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

jerry110

新虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励经验交流 2010-12-28 09:02:27
我们是25微升的体系，但是酶只加0.5微升啊，不知道你们是怎样的，扩不出来可以调节一下其他的量
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-12-27 10:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hnndpt

铁虫 (正式写手)
[quote]Originally posted by hclcarl at 2010-12-27 10:13:22:

应该把各种组分的浓度加上吧 我们实验室用的是宝生物的Taq酶 25ul的体系加0.125ul的Taq酶 [/quote


我们用的酶是老板的同学实验室自己做的，所以浓度也不太清楚！
赞一下 回复此楼
4楼2010-12-27 10:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

武荷花S

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-28 09:02:49
把各成分浓度标上
一般扩不出条带 很大原因是模板和引物
如果是通用引物 模板是否讲解
如果是自己设计的 建议重新设计引物
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-12-27 10:20:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭