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hnndpt

铁虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR反应体系请教! 已有10人参与

最近在扩增基因,用如下程序,扩好多次都没结果,只有引物2聚体,大家帮看下反应程序有无问题。
   
                    水: 12.2微升
                    10*buffer: 2微升
                    DNTP:2微升
                    引物F(5PM): 0.8微升
                      引物R(5PM): 0.8微升
                       Taq:  0.2微升
                       CDNA模板:2微升
早上来老板说酶加少了,应该加2微升,引物应该提高到4微升。排队等PCR仪中,哪位高人看下,体系还有什么需要优化的?
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武荷花S

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-12-28 09:02:49
把各成分浓度标上
一般扩不出条带 很大原因是模板和引物
如果是通用引物 模板是否讲解
如果是自己设计的 建议重新设计引物
5楼2010-12-27 10:20:24
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jerry110

新虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):鼓励经验交流 2010-12-28 09:02:27
我们是25微升的体系,但是酶只加0.5微升啊,不知道你们是怎样的,扩不出来可以调节一下其他的量
2楼2010-12-27 10:00:25
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hclcarl

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by hnndpt at 2010-12-27 09:18:21:
最近在扩增基因,用如下程序,扩好多次都没结果,只有引物2聚体,大家帮看下反应程序有无问题。
   
                    水: 12.2微升
                    10*buffer: 2微升
                    DNTP:2微 ...

应该把各种组分的浓度加上吧 我们实验室用的是宝生物的Taq酶 25ul的体系加0.125ul的Taq酶
3楼2010-12-27 10:13:22
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hnndpt

铁虫 (正式写手)

[quote]Originally posted by hclcarl at 2010-12-27 10:13:22:

应该把各种组分的浓度加上吧 我们实验室用的是宝生物的Taq酶 25ul的体系加0.125ul的Taq酶 [/quote


我们用的酶是老板的同学实验室自己做的,所以浓度也不太清楚!
4楼2010-12-27 10:16:47
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