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hnndpt

铁虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】PCR反应体系请教！已有10人参与

最近在扩增基因，用如下程序，扩好多次都没结果，只有引物2聚体，大家帮看下反应程序有无问题。

                  水： 12.2微升
                  10*buffer： 2微升
                  DNTP:2微升
                  引物F（5PM）: 0.8微升
                  引物R（5PM）: 0.8微升
                     Taq:  0.2微升
                     CDNA模板：2微升
早上来老板说酶加少了，应该加2微升，引物应该提高到4微升。排队等PCR仪中，哪位高人看下，体系还有什么需要优化的？

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1楼 2010-12-27 09:18:21

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jerry110

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★
dhd997(金币+1):鼓励经验交流 2010-12-28 09:02:27

我们是25微升的体系，但是酶只加0.5微升啊，不知道你们是怎样的，扩不出来可以调节一下其他的量

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2楼2010-12-27 10:00:25

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hclcarl

铁虫 (初入文坛)

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★
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引用回帖:

Originally posted by hnndpt at 2010-12-27 09:18:21:
最近在扩增基因，用如下程序，扩好多次都没结果，只有引物2聚体，大家帮看下反应程序有无问题。

                  水： 12.2微升
                  10*buffer： 2微升
                  DNTP:2微 ...

应该把各种组分的浓度加上吧我们实验室用的是宝生物的Taq酶 25ul的体系加0.125ul的Taq酶

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3楼2010-12-27 10:13:22

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hnndpt

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[quote]Originally posted by hclcarl at 2010-12-27 10:13:22:

应该把各种组分的浓度加上吧我们实验室用的是宝生物的Taq酶 25ul的体系加0.125ul的Taq酶 [/quote

我们用的酶是老板的同学实验室自己做的，所以浓度也不太清楚！

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4楼2010-12-27 10:16:47

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