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王有朝

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[交流] 【求助/交流】引物设计问题

引物长度16bp，这对引物TM值在primer5.0上显示46摄氏度和44摄氏度，不知道能不能用啊？

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1楼 2010-12-06 16:51:25

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rainwander

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你为什么会想它不可以用呢？

2楼2010-12-06 17:02:14

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fjt198719

木虫 (著名写手)

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★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-12-06 19:09:32
王有朝(金币+1): 2011-05-01 13:21:14

普通PCR和SOE-PCR本人从来都是手写，至今没问题，合成单子上80度和60度一起扩，用55度，扩得好得很，不过你设计的才16bp短了点吧

赞一下(1人)

3楼2010-12-06 17:03:19

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傻子

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王有朝(金币+1): 2011-05-01 13:21:18

16bp的引物短了些吧，考虑20bp左右的，而且太短的引物对特异性也会造成影响

4楼2010-12-06 19:44:21

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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)

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太短了。特异性19bp以上。简并22bp以上

5楼2010-12-06 20:15:04

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waiwaidou_1983

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★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5):鼓励交流，谢谢参与。 2010-12-06 20:24:00

稍微短了点，我用过的最短的18bp，肯定没问题的。

因为短所以退火温度会低

但我觉得你可以试一下，如果可以呢就回来告诉我们16bp也OK

赞一下(1人)

6楼2010-12-06 20:20:34

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无风的小屋

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引物怎么这么短啊？再说TM值也没见过这么低的。希望你再斟酌一下

7楼2010-12-06 21:24:33

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

呵呵，试了才知道，PCR一次再说吧。

8楼2010-12-06 21:25:59

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王有朝

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呵呵

好。我试试

9楼2010-12-06 23:00:44

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rainwander

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试完以后，记得来告诉大家你的结果啊

10楼2010-12-06 23:40:30

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