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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】引物设计问题
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王有朝

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】引物设计问题

引物长度16bp，这对引物TM值在primer5.0上显示46摄氏度和44摄氏度，不知道能不能用啊？
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1楼 2010-12-06 16:51:25
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
你为什么会想它不可以用呢？
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2楼2010-12-06 17:02:14
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fjt198719

木虫 (著名写手)
★
amisking(金币+1):鼓励交流！ 2010-12-06 19:09:32
王有朝(金币+1): 2011-05-01 13:21:14
普通PCR和SOE-PCR本人从来都是手写，至今没问题，合成单子上80度和60度一起扩，用55度，扩得好得很，不过你设计的才16bp短了点吧
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3楼2010-12-06 17:03:19
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傻子

木虫 (正式写手)
王有朝(金币+1): 2011-05-01 13:21:18
16bp的引物短了些吧，考虑20bp左右的，而且太短的引物对特异性也会造成影响
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4楼2010-12-06 19:44:21
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yixuanwin

铁杆木虫 (正式写手)
太短了。 特异性19bp以上。 简并22bp以上
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5楼2010-12-06 20:15:04
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waiwaidou_1983

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5):鼓励交流，谢谢参与。 2010-12-06 20:24:00
稍微短了点，我用过的最短的18bp，肯定没问题的。

因为短 所以退火温度会低

但我觉得你可以试一下，如果可以呢 就回来告诉我们16bp也OK
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6楼2010-12-06 20:20:34
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无风的小屋

金虫 (小有名气)
引物怎么这么短啊？再说TM值也没见过这么低的。希望你再斟酌一下
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7楼2010-12-06 21:24:33
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
呵呵，试了才知道，PCR一次再说吧。
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8楼2010-12-06 21:25:59
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王有朝

新虫 (小有名气)

呵呵

好。我试试
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9楼2010-12-06 23:00:44
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
试完以后，记得来告诉大家你的结果啊
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10楼2010-12-06 23:40:30
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