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Silencess

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】质粒提取纯度不高*绝对定量·急求高手赐教!

想做荧光定量的绝对定量·

用质粒做标准曲线

但是每次的提取的质粒测出来的纯度总是不高
用过OMEGA和TAKARA的试剂盒·结果都不好·OD260/280基本都在1,7以下··想问问各位高手有没有什么经验没?
另外  我觉得每次裂解 离心10分钟以后 上清中还是会有细小的的悬浮物·就算增加离心速度和时间也是一样· 我想问问这是什么原因?

还有就是荧光定量的绝对定量·我想问问标准曲线制作的时候· 模板的梯度浓度是根据什么确定呢?

急求各位高手赐教啊!!
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


Silencess(金币+1):谢谢 2010-12-01 08:45:09
是在不行在冰上操作吧。
5楼2010-11-30 12:16:43
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)


Silencess(金币+1): 2010-11-30 09:27:49
有细小悬浮物极有可能是裂解过度造成的。
2楼2010-11-30 08:37:22
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Silencess

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2010-11-30 08:37:22:
有细小悬浮物极有可能是裂解过度造成的。

那请问 是前面的混匀时的时间太长么》?我已经尽力轻了啊。、、
3楼2010-11-30 09:29:41
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Silencess(金币+1):谢谢 2010-12-01 08:45:19
S2那一步时间不要超过5分钟,并且在反转混匀的时候动作要轻,防止基因组断裂
6楼2010-11-30 12:28:44
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