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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】质粒提取纯度不高*绝对定量·急求高手赐教！
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Silencess

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】质粒提取纯度不高*绝对定量·急求高手赐教！

想做荧光定量的绝对定量·

用质粒做标准曲线

但是每次的提取的质粒测出来的纯度总是不高
用过OMEGA和TAKARA的试剂盒·结果都不好·OD260/280基本都在1,7以下··想问问各位高手有没有什么经验没？
另外  我觉得每次裂解 离心10分钟以后 上清中还是会有细小的的悬浮物·就算增加离心速度和时间也是一样· 我想问问这是什么原因？

还有就是荧光定量的绝对定量·我想问问标准曲线制作的时候· 模板的梯度浓度是根据什么确定呢？

急求各位高手赐教啊！！
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1楼 2010-11-29 15:27:17
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
Silencess(金币+1): 2010-11-30 09:27:49
有细小悬浮物极有可能是裂解过度造成的。
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2楼2010-11-30 08:37:22
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Silencess

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2010-11-30 08:37:22:
有细小悬浮物极有可能是裂解过度造成的。

那请问 是前面的混匀时的时间太长么》？我已经尽力轻了啊。、、
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3楼2010-11-30 09:29:41
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
时间缩短
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4楼2010-11-30 09:39:22
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
Silencess(金币+1):谢谢 2010-12-01 08:45:09
是在不行在冰上操作吧。
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5楼2010-11-30 12:16:43
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
Silencess(金币+1):谢谢 2010-12-01 08:45:19
S2那一步时间不要超过5分钟，并且在反转混匀的时候动作要轻，防止基因组断裂
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6楼2010-11-30 12:28:44
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Silencess

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 空谷幽风 at 2010-11-30 12:28:44:
S2那一步时间不要超过5分钟，并且在反转混匀的时候动作要轻，防止基因组断裂

应该没有超过1分钟，，内牛满面啊。。。。
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7楼2010-11-30 15:05:20
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马敏马

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也在做标准曲线，这段时间也遇到同样的问题，我用的是天根的试剂盒，质粒纯度总达不到1.8，浓度也都在
30-50左右。而且重复三次测OD值，三次值也相差很远，都不敢相信纯度值了。
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9楼2017-04-18 15:45:43
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Silencess8楼
2010-12-01 08:45   回复  
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