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wangy0908

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[交流] 【求助/交流】这种PCR结果是为什么

这段时间做的pcr,在1%的gel电泳。重复了几次都是密散的。
是做的Inverse PCR, 酶切后自连接，自连接的DNA用量是10ng，50ul体系。取2ul做第一次pcr，第一次PCR产物稀释200倍，取2ul做第二次pcr。图片就是第二次pcr产物。第一次的pcr产物电泳没有任何结果。
请教各位高人指点指点！！

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1楼 2010-11-11 03:16:59

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wangy0908

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by xulanzzz at 2010-11-11 10:35:33:
首先看看Marker 说明你的胶做的不是很好，当然胶不是最主要的问题。模板时间有多长了，是否已经降解？？其次，应该从两方面来考虑：一是PCR产物自身的原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度 ...

点击缓冲液是新配的，电压我用的80v。也就说电泳是应该没有问题的。但是我可能用的酶量太高了，我用的是0.5ul Program的酶，以及循环36.