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wangy0908

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】这种PCR结果是为什么

这段时间做的pcr,在1%的gel电泳。重复了几次都是密散的。
是做的Inverse PCR, 酶切后自连接,自连接的DNA用量是10ng,50ul体系。取2ul做第一次pcr, 第一次PCR产物稀释200倍,取2ul做第二次pcr。图片就是第二次pcr产物。第一次的pcr产物电泳没有任何结果。
请教各位高人指点指点!!
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wangy0908

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by xulanzzz at 2010-11-11 10:35:33:
首先 看看Marker 说明你的胶做的不是很好,当然胶不是最主要的问题。模板时间有多长了,是否已经降解??其次,应该从两方面来考虑:一是PCR产物自身的原因往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度 ...

点击缓冲液是新配的,电压我用的80v。也就说电泳是应该没有问题的。但是我可能用的酶量太高了,我用的是0.5ul Program的酶,以及循环36.
9楼2010-11-11 19:49:48
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randomqd

木虫 (小有名气)


有可能是loading

wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:57:37
看一下上样buf有没有问题。。。
2楼2010-11-11 08:31:35
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magy2006

木虫 (著名写手)


wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:43:40
模板浓度极高外加循环数极多
3楼2010-11-11 08:37:36
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aaron2012

银虫 (初入文坛)


下次建议时间跑长点  你看Marker都没有完全分开
4楼2010-11-11 09:33:23
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