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wangy0908

金虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】这种PCR结果是为什么

这段时间做的pcr,在1%的gel电泳。重复了几次都是密散的。
是做的Inverse PCR, 酶切后自连接,自连接的DNA用量是10ng,50ul体系。取2ul做第一次pcr, 第一次PCR产物稀释200倍,取2ul做第二次pcr。图片就是第二次pcr产物。第一次的pcr产物电泳没有任何结果。
请教各位高人指点指点!!
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dayulee

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
marker也没有跑好这个问题不是关键。肯定的是你的条带确实特异性很差,你可以根据上面老师的回复去考虑,另外稍微做个温度梯度的PCR,再跑胶看看。你的marker选择也不太合适,条带太多了,你要是条带大小已知的话,你换个适合大小的marker。祝你成功。
19楼2012-08-06 11:16:35
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randomqd

木虫 (小有名气)


有可能是loading

wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:57:37
看一下上样buf有没有问题。。。
2楼2010-11-11 08:31:35
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magy2006

木虫 (著名写手)


wangy0908(金币+1): 2010-11-11 19:43:40
模板浓度极高外加循环数极多
3楼2010-11-11 08:37:36
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aaron2012

银虫 (初入文坛)


下次建议时间跑长点  你看Marker都没有完全分开
4楼2010-11-11 09:33:23
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