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nestzhao

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助几个问题

各位,最近做双酶切,有几个问题,向大家请教一下
1、提取质粒时,一般说的“培养过夜”,这是一个什么概念,一般应该培养多少小时为宜?
2、在一般的内切酶说明书中,一般都说质粒含量≤1μg,这个1μg是个什么概念,该怎么控制这个含量?
3、提完质粒后,跑琼脂糖凝胶电泳,条带不是很亮,而且同时提几管质粒,有几管有条带,比较亮,有几管却没有或暗很多,不知道是什么原因。质粒时用试剂盒提的,操作都是同样的,而且已经不是一次出现这种情况了。
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给力2011
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amilie030312

金虫 (正式写手)


dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-11-01 10:16:18
nestzhao(金币+1): 2010-11-01 18:20:58
一般过夜培养的概念是12个小时左右,短的8小时就足够了,不好的要16个小时,这个要看张得颜色,我觉得是凭经验来的
我觉得如果是酶切就检验一下那也无所谓上样量小于多少了,能切开就行,如果是下游实验要求必须全部且完全,那可以延长酶切时间,不过有些酶延长时间容易产生星号活性,所以能延长时间的酶就可以用延长时间来使酶切彻底。
至于你第三个问题俺就不知道是啥情况了。
2楼2010-11-01 09:48:46
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fzfangtao

木虫 (正式写手)

nestzhao(金币+1): 2010-11-01 18:21:04
12-14小时;能切开就行,一般买来的酶浓度很大的;可能性很多
3楼2010-11-01 16:55:08
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tian1203

银虫 (著名写手)

nestzhao(金币+1): 2010-11-01 23:01:32
遇到了和你一样的问题:dnd:打算买快速酶试试
别紧张,我不是什么好人...
4楼2010-11-01 18:52:08
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hyy2005bne

新虫 (小有名气)


dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-03 20:04:37
nestzhao(金币+1): 2010-11-03 22:09:06
1、培养过夜一般是12个小时,也分菌吧,大肠一般8h就可以了,谷氨酸棒杆菌说的过夜培养一般为16h,你也可以根据菌浓来决定具体时间。
2、我知道有质粒定量的,者应该是个浓度单位,具体的也不太明白。
3、不知道你们实验室的其他同学也出现过你这种情况吗,如果有的话,可能就是试剂盒的问题吧
5楼2010-11-03 20:01:10
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keyanhrc

新虫 (小有名气)

★ ★
dhd997(金币+2):good 2010-11-05 14:15:58
1.培养过夜一般都是指12h。但培养时也不要太“本本主义”,要看菌液浓度,我用的都是大肠杆菌,一般摇到浅乳白色就行,这要凭经验来辨别。摇菌所用的容器也有关系,三角瓶里长的快,试管里慢。
2.DNA和RNA都可以用紫外分光光度计来测定其浓度的,测定得到的数据可以换算成μg/ml。
3.新提的质粒跑电泳没条带,最大的可能就是没有转化成功或菌液污染。看看跑出条带的菌液和没有条带的菌液颜色是否有区别。
6楼2010-11-05 12:05:58
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