应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于cloning几个简单的问题，希望大家帮忙
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1058  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

alexguo221

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于cloning几个简单的问题，希望大家帮忙 已有6人参与

最近在做cloning，用的vector是pRSETA和pET21A用bam1酶切，想割胶回收作为重组质粒的载体。酶切的结果是两个质粒都有两条很亮的条带，而且靠的很近。这是什么情况？我改切哪一条？
还有在做ligation的时候老板叫我用去磷酸化酶事先处理下vector，这是为什么，能有什么效果。
非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
世道再难，也要呼吸顺畅。
1楼 2010-12-20 21:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-12-20 22:23:09
1、跑电泳有没有做个酶切前的对照？两条带，可能是没有切干净哦~~
2、这是个很基础的问题，单酶切在连接的时候很容易自连，载体去了磷酸，自连成键的基础就没有了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-20 22:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-20 22:02:38:
1、跑电泳有没有做个酶切前的对照？两条带，可能是没有切干净哦~~
2、这是个很基础的问题，单酶切在连接的时候很容易自连，载体去了磷酸，自连成键的基础就没有了

absolutely right,back up
赞一下(1人) 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
3楼2010-12-20 22:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
载体很可能没有完全酶切，减少酶切载体的量切一下看，单酶切的载体一般要去磷酸化是防止载体自连的
赞一下(1人) 回复此楼
海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
4楼2010-12-20 22:34:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by alexguo221 at 2010-12-20 21:54:15:
最近在做cloning，用的vector是pRSETA和pET21A用bam1酶切，想割胶回收作为重组质粒的载体。酶切的结果是两个质粒都有两条很亮的条带，而且靠的很近。这是什么情况？我改切哪一条？
还有在做ligation的时候老板叫 ...

那我应该选哪一条带呢。谢谢。
赞一下 回复此楼
世道再难，也要呼吸顺畅。
5楼2010-12-21 14:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你把没有酶切的质粒一起跑做为对照就知道切哪个了，如果载体本身没有切下大片段的话，应该是上面那条吧
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-12-21 15:34:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2010-12-21 15:34:45:
你把没有酶切的质粒一起跑做为对照就知道切哪个了，如果载体本身没有切下大片段的话，应该是上面那条吧

恩，非常感谢你
回复此楼
世道再难，也要呼吸顺畅。
7楼2010-12-21 15:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlw8486

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-12-22 12:03:05
去磷酸化主要是为要了让载体不自连
赞一下(2人) 回复此楼
justsoso......
8楼2010-12-22 09:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alexguo221 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 338求调剂 +4 wxygxsaaaaa 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:14 by 尚水阁主
[考研] 273求调剂 +4 麦小叮当 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:12 by swb0218
[考研] 085405软件工程301分求调剂，专硕可跨专业，四六级已过 +3 静静想想 2026-04-05 3/150 2026-04-06 15:23 by nepu_uu
[考研] 0703化学 +18 妮妮ninicgb 2026-04-04 19/950 2026-04-06 12:51 by zllcz
[考研] 085600，320分求调剂 +7 大馋小子 2026-04-01 8/400 2026-04-05 21:19 by 学员8dgXkO
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-03-30 10/500 2026-04-05 17:57 by jj987
[考研] 材料调剂 +9 革微桂 2026-04-04 9/450 2026-04-05 08:27 by 544594351
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 333求调剂 +12 wfh030413@ 2026-04-03 13/650 2026-04-04 21:02 by jj987
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 273求调剂 +20 李芷新1 2026-03-31 20/1000 2026-04-03 09:58 by linyelide
[考研] 325分化学调剂 +5 15771691647 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:58 by ChemPharm
[考研] 重庆大学材料与化工085600，初试370+，求求调剂建议 +8 shzhou_ 2026-04-01 9/450 2026-04-03 09:31 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +9 双马尾痞老板2 2026-04-01 9/450 2026-04-02 12:14 by oooqiao
[考研] 食品学硕362求调剂 +3 xuanxianxian 2026-04-01 3/150 2026-04-01 21:05 by 啊李999
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 生物与医药考研调剂 +5 铁憨憨123425 2026-03-31 5/250 2026-04-01 18:01 by syh9288
[考研] 省双一流重点一本大学招收调剂 +4 wwwwffffff 2026-03-31 7/350 2026-04-01 15:23 by wwwwffffff
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135，现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭