应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于cloning几个简单的问题，希望大家帮忙
81/1返回列表
查看: 1232  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

alexguo221

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于cloning几个简单的问题，希望大家帮忙 已有6人参与

最近在做cloning，用的vector是pRSETA和pET21A用bam1酶切，想割胶回收作为重组质粒的载体。酶切的结果是两个质粒都有两条很亮的条带，而且靠的很近。这是什么情况？我改切哪一条？
还有在做ligation的时候老板叫我用去磷酸化酶事先处理下vector，这是为什么，能有什么效果。
非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
世道再难，也要呼吸顺畅。
1楼 2010-12-20 21:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-12-20 22:23:09
1、跑电泳有没有做个酶切前的对照？两条带，可能是没有切干净哦~~
2、这是个很基础的问题，单酶切在连接的时候很容易自连，载体去了磷酸，自连成键的基础就没有了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-20 22:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-20 22:02:38:
1、跑电泳有没有做个酶切前的对照？两条带，可能是没有切干净哦~~
2、这是个很基础的问题，单酶切在连接的时候很容易自连，载体去了磷酸，自连成键的基础就没有了

absolutely right,back up
赞一下(1人) 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
3楼2010-12-20 22:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
载体很可能没有完全酶切，减少酶切载体的量切一下看，单酶切的载体一般要去磷酸化是防止载体自连的
赞一下(1人) 回复此楼
海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
4楼2010-12-20 22:34:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by alexguo221 at 2010-12-20 21:54:15:
最近在做cloning，用的vector是pRSETA和pET21A用bam1酶切，想割胶回收作为重组质粒的载体。酶切的结果是两个质粒都有两条很亮的条带，而且靠的很近。这是什么情况？我改切哪一条？
还有在做ligation的时候老板叫 ...

那我应该选哪一条带呢。谢谢。
赞一下 回复此楼
世道再难，也要呼吸顺畅。
5楼2010-12-21 14:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你把没有酶切的质粒一起跑做为对照就知道切哪个了，如果载体本身没有切下大片段的话，应该是上面那条吧
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-12-21 15:34:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2010-12-21 15:34:45:
你把没有酶切的质粒一起跑做为对照就知道切哪个了，如果载体本身没有切下大片段的话，应该是上面那条吧

恩，非常感谢你
回复此楼
世道再难，也要呼吸顺畅。
7楼2010-12-21 15:50:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mlw8486

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2010-12-22 12:03:05
去磷酸化主要是为要了让载体不自连
赞一下(2人) 回复此楼
justsoso......
8楼2010-12-22 09:57:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alexguo221 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 7/350 2026-08-15 09:09 by 4wMiSEwB6436
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 07:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +24 医学老男孩 2026-08-13 50/2500 2026-08-15 06:38 by 学员8dgXkO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭