应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于cloning几个简单的问题，希望大家帮忙
51/1返回列表
查看: 1396  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于cloning几个简单的问题，希望大家帮忙 已有6人参与

最近在做cloning，用的vector是pRSETA和pET21A用bam1酶切，想割胶回收作为重组质粒的载体。酶切的结果是两个质粒都有两条很亮的条带，而且靠的很近。这是什么情况？我改切哪一条？
还有在做ligation的时候老板叫我用去磷酸化酶事先处理下vector，这是为什么，能有什么效果。
非常感谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
世道再难，也要呼吸顺畅。
1楼 2010-12-20 21:54:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
载体很可能没有完全酶切，减少酶切载体的量切一下看，单酶切的载体一般要去磷酸化是防止载体自连的
赞一下(1人) 回复此楼
海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
4楼2010-12-20 22:34:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):鼓励交流 2010-12-20 22:23:09
1、跑电泳有没有做个酶切前的对照？两条带，可能是没有切干净哦~~
2、这是个很基础的问题，单酶切在连接的时候很容易自连，载体去了磷酸，自连成键的基础就没有了
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-12-20 22:02:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sutao1979

木虫 (著名写手)

小木虫10年groupleader
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-20 22:02:38:
1、跑电泳有没有做个酶切前的对照？两条带，可能是没有切干净哦~~
2、这是个很基础的问题，单酶切在连接的时候很容易自连，载体去了磷酸，自连成键的基础就没有了

absolutely right,back up
赞一下(1人) 回复此楼
会当凌绝顶，一览众山小
3楼2010-12-20 22:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alexguo221

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by alexguo221 at 2010-12-20 21:54:15:
最近在做cloning，用的vector是pRSETA和pET21A用bam1酶切，想割胶回收作为重组质粒的载体。酶切的结果是两个质粒都有两条很亮的条带，而且靠的很近。这是什么情况？我改切哪一条？
还有在做ligation的时候老板叫 ...

那我应该选哪一条带呢。谢谢。
赞一下 回复此楼
世道再难，也要呼吸顺畅。
5楼2010-12-21 14:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:14 by xSrQNSSjcgoX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 11:03 by xSrQNSSjcgoX
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 TZqyNTBa07NP 2026-11-13 3/150 2026-11-15 09:46 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:18 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 08:07 by xSrQNSSjcgoX
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 SX5mJmPWDfOO 2026-11-13 3/150 2026-11-15 07:56 by xSrQNSSjcgoX
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 7/350 2026-11-15 03:32 by xSrQNSSjcgoX
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 uKOSCocCb6Fm 2026-11-12 6/300 2026-11-15 02:59 by xSrQNSSjcgoX
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 FChKX8meu1ds 2026-11-09 8/400 2026-11-15 00:35 by Equinoxhua
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 9/450 2026-11-13 11:13 by Equinoxhua
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 C6CRn66RYYXS 2026-11-10 6/300 2026-11-13 11:04 by Equinoxhua
[考博] 27博士申请 +5 白白白ly 2026-11-09 5/250 2026-11-13 05:01 by wlf1982
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 cdqGD6ftHmbl 2026-11-11 5/250 2026-11-12 12:28 by ECLTXnJnRSXf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Z7qfCsdIiD1T 2026-11-10 7/350 2026-11-12 11:31 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:03 by HajghKOMynmz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 czAiolzR0IJC 2026-11-10 9/450 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 czAiolzR0IJC 2026-11-10 6/300 2026-11-12 11:00 by HajghKOMynmz
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 G2rhSvqvhNzl 2026-11-10 6/300 2026-11-12 10:49 by HajghKOMynmz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 czAiolzR0IJC 2026-11-10 5/250 2026-11-12 06:36 by 9fOTqj074tIg
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 8/400 2026-11-12 04:57 by 9fOTqj074tIg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭