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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助几个问题
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nestzhao

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助几个问题

各位，最近做双酶切，有几个问题，向大家请教一下
1、提取质粒时，一般说的“培养过夜”，这是一个什么概念，一般应该培养多少小时为宜？
2、在一般的内切酶说明书中，一般都说质粒含量≤1μg，这个1μg是个什么概念，该怎么控制这个含量？
3、提完质粒后，跑琼脂糖凝胶电泳，条带不是很亮，而且同时提几管质粒，有几管有条带，比较亮，有几管却没有或暗很多，不知道是什么原因。质粒时用试剂盒提的，操作都是同样的，而且已经不是一次出现这种情况了。
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给力2011
1楼 2010-10-31 23:24:53
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-11-01 10:16:18
nestzhao(金币+1): 2010-11-01 18:20:58
一般过夜培养的概念是12个小时左右，短的8小时就足够了，不好的要16个小时，这个要看张得颜色，我觉得是凭经验来的
我觉得如果是酶切就检验一下那也无所谓上样量小于多少了，能切开就行，如果是下游实验要求必须全部且完全，那可以延长酶切时间，不过有些酶延长时间容易产生星号活性，所以能延长时间的酶就可以用延长时间来使酶切彻底。
至于你第三个问题俺就不知道是啥情况了。
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2楼2010-11-01 09:48:46
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fzfangtao

木虫 (正式写手)
nestzhao(金币+1): 2010-11-01 18:21:04
12-14小时；能切开就行，一般买来的酶浓度很大的；可能性很多
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3楼2010-11-01 16:55:08
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tian1203

银虫 (著名写手)
nestzhao(金币+1): 2010-11-01 23:01:32
遇到了和你一样的问题:dnd:打算买快速酶试试
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别紧张，我不是什么好人...
4楼2010-11-01 18:52:08
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hyy2005bne

新虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-11-03 20:04:37
nestzhao(金币+1): 2010-11-03 22:09:06
1、培养过夜一般是12个小时，也分菌吧，大肠一般8h就可以了，谷氨酸棒杆菌说的过夜培养一般为16h，你也可以根据菌浓来决定具体时间。
2、我知道有质粒定量的，者应该是个浓度单位，具体的也不太明白。
3、不知道你们实验室的其他同学也出现过你这种情况吗，如果有的话，可能就是试剂盒的问题吧
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5楼2010-11-03 20:01:10
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keyanhrc

新虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2):good 2010-11-05 14:15:58
1.培养过夜一般都是指12h。但培养时也不要太“本本主义”，要看菌液浓度，我用的都是大肠杆菌，一般摇到浅乳白色就行，这要凭经验来辨别。摇菌所用的容器也有关系，三角瓶里长的快，试管里慢。
2.DNA和RNA都可以用紫外分光光度计来测定其浓度的，测定得到的数据可以换算成μg/ml。
3.新提的质粒跑电泳没条带，最大的可能就是没有转化成功或菌液污染。看看跑出条带的菌液和没有条带的菌液颜色是否有区别。
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6楼2010-11-05 12:05:58
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