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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助急急急 已有3人参与

大家好,我现在做的是连接,载体是pet32a,片段大约300bp(PCR产物)分别用ECOR1和Hind3双酶切后割胶纯化亮度也可以,做过好几次连接都不长斑,连接体系尝试过好种都不行,两个酶是没有问题,之前连接进去一个,剩下的几个样就再也连不上了。感受态也没有问题,因为对照是没问题的。
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muchong5577

金虫 (正式写手)

dingyanhua(金币+1): 2010-08-04 07:38:32
是不是连接酶失效了、平板拿错了抗性的?
2楼2010-08-02 15:14:53
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被太阳追逐

新虫 (初入文坛)


lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-02 17:02:00
dingyanhua(金币+1): 2010-08-04 07:38:51
dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:19
pcr片段连个t载测下序吧,看一下引物是否正确,之前试验室出现过一个情况,就是引物合成时给缺失了一个碱基,一个克隆做了很久没做出来。要是这没错就只能多做几次啦。
3楼2010-08-02 15:35:43
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)

连出几个来了,可能是连接体系的问题。以前用的连接体系现在不太好用了,可能是目的片段太小了
4楼2010-08-04 07:39:56
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:04
300bp的链接效率比较低。你可以考虑提高酶切片段的浓度,或者链接在T载体上,然后酶切在连到你目的载体上。。
5楼2010-08-11 19:56:56
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)

谢谢大家的帮助,我已经解决了,片段小了连接体系需要调节一下。
6楼2010-08-12 08:53:00
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:10
祝你好运!
梦在路就在!
7楼2010-08-12 09:11:11
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zhandeguo1

银虫 (小有名气)

可喜可贺

生物实验有时就是这样,多重复几次就好
8楼2010-08-19 17:20:10
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