应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助急急急
81/1返回列表
查看: 992  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dingyanhua

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助急急急 已有3人参与

大家好，我现在做的是连接，载体是pet32a，片段大约300bp（PCR产物）分别用ECOR1和Hind3双酶切后割胶纯化亮度也可以，做过好几次连接都不长斑，连接体系尝试过好种都不行，两个酶是没有问题，之前连接进去一个，剩下的几个样就再也连不上了。感受态也没有问题，因为对照是没问题的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-02 14:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

muchong5577

金虫 (正式写手)
dingyanhua(金币+1): 2010-08-04 07:38:32
是不是连接酶失效了、平板拿错了抗性的？
赞一下 回复此楼
2楼2010-08-02 15:14:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

被太阳追逐

新虫 (初入文坛)
★
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-02 17:02:00
dingyanhua(金币+1): 2010-08-04 07:38:51
dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:19
pcr片段连个t载测下序吧，看一下引物是否正确，之前试验室出现过一个情况，就是引物合成时给缺失了一个碱基，一个克隆做了很久没做出来。要是这没错就只能多做几次啦。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-08-02 15:35:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingyanhua

铜虫 (小有名气)
连出几个来了，可能是连接体系的问题。以前用的连接体系现在不太好用了，可能是目的片段太小了
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-04 07:39:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:04
300bp的链接效率比较低。你可以考虑提高酶切片段的浓度，或者链接在T载体上，然后酶切在连到你目的载体上。。
赞一下 回复此楼
5楼2010-08-11 19:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dingyanhua

铜虫 (小有名气)
谢谢大家的帮助，我已经解决了，片段小了连接体系需要调节一下。
赞一下 回复此楼
6楼2010-08-12 08:53:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫
dingyanhua(金币+1): 2010-08-13 08:53:10
祝你好运！
回复此楼
梦在路就在！
7楼2010-08-12 09:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhandeguo1

银虫 (小有名气)

可喜可贺

生物实验有时就是这样，多重复几次就好
赞一下 回复此楼
8楼2010-08-19 17:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 dingyanhua 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 9/450 2026-08-04 03:56 by kf2781974
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 7/350 2026-08-04 03:35 by k7OM8YghWbkC
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 03:34 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 5/250 2026-08-04 03:30 by k7OM8YghWbkC
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 03:27 by k7OM8YghWbkC
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 4/200 2026-08-04 03:25 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 12/600 2026-08-04 03:17 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 02:10 by Ocx3OKOzGU4q
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 16/800 2026-08-03 12:23 by fuweiguochen
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +16 布布和一二 2026-07-30 22/1100 2026-08-03 09:20 by gy116024
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +8 锦衣卫寒战 2026-07-28 12/600 2026-08-03 08:22 by syl200707
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +11 winnerche 2026-07-29 15/750 2026-07-30 23:08 by jnhyjjm
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭